【系列2】胎牛血清RNA干擾了細(xì)胞培養(yǎng)外源性RNA

值得注意的是，無論是EV-富集和EV-貧餾分包含多樣RNA種類，包括mRNA和rRNA基因，miRNA的，以及其他非編碼轉(zhuǎn)錄（反義，的snoRNA，Y的RNA等）。兩套餾分之間的差別在很大程度上是定量的，用的miRNA和rRNA基因片段相對的丸狀餾分富集，mRNA和的snoRNA-上清液中?；赗NA劇目，皮爾森聚類分析顯示，EV-豐富和EV-耗盡分?jǐn)?shù)（明確分開圖1e ）。

從5.2％到12.9％讀取映射到人類基因組對應(yīng)的miRNA。MIR-122是最豐富的miRNA在FBS的，隨后的miR-1246中，miR-423-5p中，miR-148A-3P，和let-7家族（圖1F）。在FBS的這些miRNA的高水平通過qRT-PCR（進一步證實圖1G。耗盡的效率，定義為沉淀和上清液的級分之間存在比例，分別為這些miRNA基本上不同，這表明它們與電動汽車和的RNP不同的關(guān)聯(lián)。值得注意的是，上述所有的miRNA先前已經(jīng)在細(xì)胞培養(yǎng)衍生exRNA相對于細(xì)胞RNA富集報道8，10，15，16。因為他們沒有考慮FBS RNA考慮，幾乎可以肯定在條件培養(yǎng)基高估分泌和具體exRNA物種富集這可能是值得重新審視的結(jié)果。FBS的RNA的讀出也被映射到小鼠基因組（圖1F），表明FBS的RNA可能影響人類和嚙齒類動物培養(yǎng)exRNA分析的結(jié)果。因此，盡管FBS RNA水平較低，它的貢獻應(yīng)該仔細(xì)的研究exRNA考慮，因為misannotated牛成績單會導(dǎo)致誤報和曲解，尤其是當(dāng)RNA釋放和富集的細(xì)胞外復(fù)合物的決定因素進行了研究。

FBS源性的miR-1246在培養(yǎng)的小鼠細(xì)胞中檢測到

更廣泛意義的附加問題是FBS相關(guān)RNA是否可與細(xì)胞RNA干擾分析。編碼FBS中最豐富表達的miRNA的一種miR-1246基因，存在于只有4的223種，包括牛，人，猩猩和黑猩猩，但不是在小鼠或大鼠17。有沒有同源的小鼠基因組鑒定的hsa-的miR-1246的序列。然而，在所有測試的小鼠細(xì)胞系用10％FBS（培養(yǎng)的一致和可重復(fù)地檢測到成熟miR-1246的低水平圖1H雙方基于LNA-的SYBRGreen法（Exiqon）和TaqMan測定（的Thermo Fisher Scientific）。受體細(xì)胞系之間的miR-1246信號變化，這表明在不同細(xì)胞的不同層次的攝取和/或處理的。所述miR-1246信號（即進行了前RNA分離7天切換到10％vdFBS培養(yǎng)基和檢測不到在小鼠組織細(xì)胞顯著減少1H圖。這個例子表明，與電動汽車和可能的非水泡性的RNP，以及相關(guān)聯(lián)的FBS RNA復(fù)合物，可能是由培養(yǎng)的細(xì)胞吸收，并與細(xì)胞RNA的量化干擾?？紤]到在目前的研究通常使用的高靈敏度的表達譜技術(shù)，能夠檢測RNA的毫微微摩爾，進一步深入的FBS的RNA相關(guān)的混雜因素的分析是必要的。截至今天，沒有數(shù)據(jù)表明在受體細(xì)胞這種低層次的牛RNA的功能活性; 然而，隨后的工作將需要準(zhǔn)確消除其影響。

英文原文：

Enrichment of specific miRNAs in cell-derived exRNA is likely caused by FBS-derived RNA contamination.