【系列2】胎牛血清RNA干擾了細(xì)胞培養(yǎng)外源性RNA

在細(xì)胞衍生exRNA特定miRNA的富集可能是由FBS的衍生的RNA污染造成的。

幾個觀察表明FBS的相關(guān)聯(lián)的RNA可能與exRNA的干擾分析。

首先，我們檢測到高水平的miR-122，在肝臟中大量表達(dá)，但未被發(fā)現(xiàn)在其他組織中的特定的miRNA的2,3，在作為單層或神經(jīng)球（培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的條件培養(yǎng)基圖1a）。考慮到缺少在成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤中的miR-122表達(dá)的4和培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞（圖1a）中，我們合理化，這一發(fā)現(xiàn)可以通過任一異常有效的miR-122的分泌來解釋，或更可信，培養(yǎng)基作為主源這種miRNA的。實(shí)際上，的miR-122在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)物中使用的新鮮無條件媒體高度豐富（圖1b），這表明在經(jīng)調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基中的大多數(shù)的miR-122的來自于培養(yǎng)基成分，而不是細(xì)胞分泌。另一具體微小RNA中，miR-451A，在不同細(xì)胞和組織中的血表示具有最高豐度2，在由各種細(xì)胞類型分泌的電動汽車被報告為最富集的miRNA 5 ,6 ，7 ，8 ，9 ，10 ，11 。與這些發(fā)現(xiàn)一致的是，我們發(fā)現(xiàn)的miR-451A在從在DMEM/10％vdFBS（生長U251和20/3膠質(zhì)瘤單層培養(yǎng)物的條件培養(yǎng)基中分離的丸狀電動汽車富集圖1a）。

然而，當(dāng)相同的細(xì)胞系在相同的葡萄糖濃度，但在無血清的神經(jīng)球促進(jìn)條件下培養(yǎng)，未在超速離心檢測的miR-451A（UC）粒料/exRNA級分（圖1a）。為了更好地理解不同培養(yǎng)基的貢獻(xiàn)，我們分離從新鮮無條件“單層培養(yǎng)基”總exRNAs（2D培養(yǎng)基含有DMEM/10％FBS），囊泡貧2D培養(yǎng)基（VD2D含有FBS的24小時后，UC），和“神經(jīng)球介質(zhì)”（3D介質(zhì)，無血清），并使用定量RT-PCR測量的miR-451A水平。MIR-451A是豐富的2D介質(zhì)，在VD2D介質(zhì)略微減少，并且在3D介質(zhì)（勉強(qiáng)檢測圖1b）。

值得注意的是，的miR-122和miR-451 VD2D媒體相對于所述粗2D介質(zhì)中的水平降低到一個不同的程度，但不能完全消除。雖然該培養(yǎng)條件影響的RNA分泌的可能性不能被排除，這些研究結(jié)果表明，基于UC的囊泡耗盡不完全從FBS/培養(yǎng)基消除RNA和該FBS的相關(guān)聯(lián)的RNA可能導(dǎo)致錯誤的結(jié)果和解釋，如此前公布的miR-451A富集exRNA。

圖1：FBS衍生的RNA干擾exRNA和細(xì)胞RNA的RNA分析。