【系列2】胎牛血清RNA干擾了細胞培養外源性RNA

（e）基于主要的RNA的組合物的對數變換后的數據的皮爾遜聚類分析顯示來自三個粒料樣品三個上清液樣品分離（表示為S）（表示為P）。

（f）在最豐富的miRNA在FBS的沉淀和上清液的級分（24小時UC）通過RNA-SEQ所檢測。值得注意的是，的miR-451不從NEBNext小RNA文庫進行測序。

（g）FBS的沉淀和上清液中選擇的miRNA的水平通過qRT-PCR測定。每組n=3的FBS等分試樣。

（h）牛和靈長類特異性的miR-1246是通過qRT-PCR在小鼠培養的細胞，但不小鼠組織檢測。N=3的細胞或每組組織切片。*P<0.05;**P<0.01;NS，不顯著。所有的棒表示平均±SEM所示。

RNA，不能從FBS的使用超速離心耗盡

我們接下來設置來表征FBS的RNA的組合物，并調查是否RNA可從血清中除去。血清的RNA與外來體和其他電動汽車，以及非膜脂和蛋白質的RNP相關聯。大多數研究人員使用70000克到110000克UC2小時，18小時，生產vdFBS。

已經證實，長時間的UC除去大部分，雖然不是所有的電動車，如通過NanoSight監測12。但是，什么延長vdFBS是RNA耗盡尚不清楚。為了解決這個問題，我們紡絲FBS的樣品以100,000g為80分鐘，5小時，或24小時，并分離總RNA從沉淀（即EV-富集）材料和上清液（即EV-耗盡。RNA也從在基線粗FBS的隔離。5-40納克/毫升總RNA從粗FBS分離，鱗和批次間變化，并與人血清的以前的評估一致13。如圖所示。1c中，即使是長時間的24小時的UC延伸超過報協議，僅除去從FBS（RNA的（19-33％）的一部分圖1c）。平均起來，vdFBS制劑含有34納克/毫升的RNA，其中大部分是最有可能與非囊泡復合物，如的RNP相關聯。無論該RNA（水泡與否）的源，它可以潛在地污染細胞培養物條件培養基和共分離物/沉淀用在隨后的程序在細胞培養的電動汽車。

FBS包含人類和小鼠的成績單無法區分保守的RNA種類多樣的劇目

為了進一步評價FBS RNA與衍生exRNA細胞培養干擾的潛力，我們進行了FBS分數RNA深度測序。FBS的三個不同批次100,000g下離心24小時，并從沉淀的EV-富集級分和EV-耗盡上清中分離的RNA樣品用于NEBNext小RNA文庫的構建，隨后HiSeq2000RNA的起。閱讀映射人類基因組hg19版本使用摘錄Genboree工作臺的小RNA-SEQ管道V2.2.8使用默認參數進行14。平均而言,13.6％和21.7％讀取來自“沉淀的RNA”和“上清液的RNA”的級分，分別映射到人類基因組，這表明FBS相關轉錄的顯著一部分進化上保守的，并且可以有助于假陽性人類細胞的分析。具有精確無失配**的映射允許，9.2％和各個級分的13.2％中讀取映射到人類基因組。兩個級分的主要的RNA的組合物，表示每百萬映射（RPM），為讀出，示于圖1D。