慢性腎功能障礙研究二三事

　　目前世界有著諸多關于腎臟慢性移植功能障礙（CTD）與持續性的免疫炎癥最終導致組織重塑（包括肝內動脈中新內膜的形成）的案例。研究表明，受體來源的α-SMA +平滑肌樣細胞存在于異源移植腎臟CTD中。含有骨髓細胞的人體PBMC（外周血單個核細胞）在體外α-SMA +具有分化能力，但是原始細胞的表型是未知的。本文威正翔禹/締一生物為您分析慢性腎功能障礙研究二三事。

　　本研究旨在發現包含細胞與平滑肌樣細胞的單細胞亞群的分化能力，是否腎移植受體CTD的單核細胞亞群會發生變化。實驗中，以CD14、CD16的表達為基礎分選健康對照組的單核細胞亞群，研究骨髓間質標記物α-SMA和SM22α的基因表達水平。

　　CD14+/CD16++顯示對比增加的α-SMA和SM22αmRNA表達水平與CD14++/ CD16-得到增加的分化潛能接近于平滑肌樣細胞。流式細胞儀結果顯示非CTD移植患者的CD14+ /CD16 ++比例減少，而且CTD患者的減少比例更高。為了確定CD14+/CD16 ++單核細胞和體外α-SMA +細胞生長潛力之間的關聯性，健康對照組和CTD移植受體，非CTD移植受體的PBMC在指定條件下培養，最終確定其顯著相關性（P = 0.0002，r= 0.62）。雙染色的α-SMA和CD16顯示CTD患者腎臟移植中α-SMA + CD16 +細胞的存在，即使數量很低。

　　數據結果表明，相比于CD14++CD16?，平滑肌樣細胞相關基因的CD14+CD16++表達增加。CTD腎移植患者的單核細胞亞群減少，可能是由于移植中的選擇性遷移的結果。

　　在對細胞的定量分析與α-SMA的表達表現測定時，利用奧地利TissueGnostics公司Tissue FAXS顯微鏡成像系統，TissueQuest軟件分析系統。

　　圖像獲取部分：

　　Fig.5，腎臟移植中熒光染色的CD16與α-SMA的聯合表達。（A）人體脾臟中CD16/CD68, CD68/α-SMA和CD16/α-SMA的雙重熒光標記。其中（B） CD16/CD68, （C） CD16/CD68 , （D） CD16/α-SMA。每項中上行non-Tx代表非移植人類腎臟，下行IF/TA代表腎臟移植。（D）中箭頭指向圈出區域CD16+α-SMA+雙陽性細胞。

　　Fig 3 腎臟移植受體和健康對照組中單細胞亞群特征。（A）散點圖中對細胞進行正向回溯。得到細胞亞群的數量（1）總活細胞數量（2）單細胞數（3）淋巴細胞（B）健康對照組，CTD腎臟移植受體和非CTD腎臟移植受體中活細胞CD14+頻率。（C）PBMC中CD14和CD16表達類型。區域2中的數據。（D）健康對照組與腎臟移植受體的單細胞亞群的頻率。

　　Fig 4 CD16-和CD16++中標記物的基因表達。（A）PBMC中CD14與CD16的表達類型。細胞群做到細胞種類的分選：（1）CD14++/CD16- （2）CD14+/CD16++   （B）單細胞亞群中的α-SMA和SM22α的基因表達。（C）14天的PBMC培養，α-SMA +細胞數與健康對照組和腎臟移植受體中的CD14+/CD16++ 頻率關聯 。

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