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新手→大神都想知道的細胞傳代指南2022-06-24 09:44來源:威正翔禹|締一生物
細胞培養(yǎng)的本質(zhì)是細胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細胞提供類似于體內(nèi)的環(huán)境,在無菌條件下,給予適當?shù)臏囟群退釅A度以及細胞生長繁殖所必要的營養(yǎng)條件,使其能在體外維持正常的生長繁殖,并保持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。 細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛,基礎(chǔ)醫(yī)學研究,抗體制備,新藥篩選,基因工程等等都需要用到細胞培養(yǎng)技術(shù)。 但在日常的細胞實驗中,實驗者經(jīng)常會遇到一些問題,今天我們就這些常見的問題給出相應(yīng)的建議,希望對小伙伴們有所幫助。 細胞培養(yǎng) Vol.1 貼壁細胞如何高效傳代? 貼壁生長的細胞,在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后,空間已基本上飽和,細胞生長、增殖受阻,為使其繼續(xù)擴增或生長,需要進行傳代(再培養(yǎng))處理。同時,傳代培養(yǎng)也可用于細胞種的保存。不僅如此,各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎(chǔ)的。 懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。 一般使用胰蛋白酶,將貼壁細胞消化成成單個細胞,也可加入EDTA提高消化能力(EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+)。 常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。 實驗時,先用吸去細胞培養(yǎng)上清,用PBS清洗細胞,棄掉洗滌液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同,一般2-5ml消化液即可,以剛好鋪滿整個皿底為原則),觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要3-5分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培養(yǎng)基中止消化。 800-1000rpm,離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養(yǎng)。 Vol.2 細胞傳代的頻率為多久? 貼壁型的細胞的匯合度約為100%的時候,需進行傳代操作。 當細胞以克隆的形式生長時,匯合度則達不到100%。對于該類型的細胞,達到或者接近**密度的時候,即觀察不到細胞明顯擴增時,就需要進行傳代。 接觸抑制型細胞需要在細胞長滿之前傳代,避免產(chǎn)生細胞長滿后接觸抑制后產(chǎn)生性狀的改變。 懸浮型的細胞必須在細胞達到**飽和密度之前傳代,懸浮細胞傳代時只需稀釋至合適的密度,讓細胞有充足的營養(yǎng)恢復(fù)到對數(shù)生長期。 Vol.3 如何處理腫瘤細胞株? 了解每株細胞可能產(chǎn)生的生物危害是很難的。
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