一招解決：細胞培養基混用問題

細胞培養常見問題大匯總——Part 2，繼續為小伙伴們答疑解惑！

對于購買的商品化細胞來說，產品目錄或者細胞說明書上所推薦的培養基，一般是細胞株的原始提供者推薦的培養基，或者是經過驗證的最利于該細胞株生活的培養基。其他培養基存在一定培養風險。因此，應謹慎更換培養基，一定要更換，推薦實驗前預先保留一份細胞種。

更換培養基有兩種方法：

1、直接更換，強制使細胞適應新的培養基；

2、還有一種更溫和的方法，傳代細胞的時候，將新培養基與原推薦使用的培養基1：1混合，并另外分出一板細胞，用原先推薦的培養基。傳代后仔細觀察細胞的生長狀態，如果混合培養基培養的細胞生長狀態不好，應立即停止更換培養基。若生長狀態好，可以繼續傳代分瓶，一板保留原推薦培養基，另外一板新培養基與原推薦使用的培養基3：1混合，繼續觀察，如果細胞狀態好，可以全部換成新鮮的培養基。

普通微生物污染：培養基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規定棄用并全面嚴格滅菌。

支原體污染：顯微鏡很難直接觀察，細胞通常表現為細胞生長緩慢，有細胞漂浮等等，可通過MB Venor?Gem qEP試劑盒，進行支原體檢測。如發現支原體污染，應按規定棄用，實驗室要及時全面消毒滅菌，防止蔓延，推薦使用MB Mycoplasma-off?對細胞培養環境進行清理 ，使用Water Shield?對水槽進行清潔、預防處理。如果細胞株珍貴，可用MB相關支原體祛除試劑Mynox?、Mynox? Gold、Zell Shield?對細胞進行處理。

細胞要養好，需要選擇品質優異的血清，如Ausbian?進口特級胎牛血清，它適合各種細胞培養，尤其適合難養細胞，如：干細胞、肝細胞，神經細胞，原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

WHO公布的《用動物細胞體外培養生產生物制品規程》中的要求：

1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當的監測系統。

2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。

5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。

6、對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國對牛血清的質量中提出比較嚴格的標準要求：

包括蛋白質含量，細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian?胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內毒素極低、產量充足的血清批次，滿足干細胞、基因敲除、原代培養、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養要求；澳洲血源，完整的檢測報告及滅病毒服務，為各類臨床相關項目的申報提供完整支持等特點。