細(xì)胞培養(yǎng)中“低調(diào)的高手”——馬血清

說起細(xì)胞培養(yǎng)用的血清，大多數(shù)人都會想到胎牛血清、新生牛血清，對于馬血清卻知之甚少。今天就給大家介紹一下血清中“低調(diào)的高手”——馬血清。

一、馬血清作用

細(xì)胞培養(yǎng)級的馬血清，經(jīng)過多次過濾，去除了許多大分子蛋白，但保留了血清中促細(xì)胞生長的活性因子，表現(xiàn)出與胎牛血清和牛血清的類似的特性，因而能用于細(xì)胞培養(yǎng)。

馬血清可以刺激成纖維細(xì)胞分化，以及細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 、細(xì)胞因子的合成。另外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞和心肌細(xì)胞、誘導(dǎo)生成樹突狀細(xì)胞等實驗均可用馬血清替代胎牛血清。

因此，馬血清通常適用于那些研究有絲分裂后，細(xì)胞關(guān)于生長因子和激素等問題的實驗。或許，我們可以這樣說，從現(xiàn)有研究來看，馬血清更適合用來研究特定種類細(xì)胞的分化。

實際實驗應(yīng)用方面：馬血清已被用作腦皮質(zhì)神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)的一種必添加物；大鼠的 PC12 細(xì)胞，在培養(yǎng)過程中，也需要在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加馬血清作為補充劑。

1. 馬血清可用于細(xì)胞培養(yǎng)和干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，例如：

（1）RPMI-1640培養(yǎng)液加馬血清培養(yǎng)臍帶血單個核細(xì)胞。

（參考文獻：李春莉, 王建偉, 姜蓉, et al. 人參總皂苷誘導(dǎo)紅系血細(xì)胞增殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[J]. 中國組織工程研究, 2009(23):4568-4572.）

（2）原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞。有人用含10%馬血清的DMEM，分離培養(yǎng)BALB/c小鼠原代腦神經(jīng)細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)和添加2%神經(jīng)細(xì)胞生長劑B27的Neurobasal培養(yǎng)基相比，含10%馬血清的DMEM培養(yǎng)基更節(jié)省成本，方便廉價。

（參考文獻：李丹, 呂耀中, 王微,等. 兩種培養(yǎng)基分離培養(yǎng)BALB/c小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞方法的比較[C]// 中國北方實驗動物科技年會. 遼寧省實驗動物學(xué)會, 2015.）

（3）誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞向成肌細(xì)胞分化

（文獻來源：劉杰,傅強.馬血清在脂肪干細(xì)胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J].中國組織工程研究, 15(14)）

（4）培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞。與胎牛血清相比，馬血清對小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的促增殖作用更好。

（文獻來源：王改琴. 當(dāng)歸多糖對小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞黏附分子表達及其黏附功能的影響[D]. 學(xué)位論文.重慶醫(yī)科大學(xué), 2008.）

（5）添加20%馬血清的L-DMEM培養(yǎng)液可誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。

（文獻來源：趙文靜，陳亞潔，劉薇.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2006.16(18):2744-2747）

2. 馬血清添加到微生物培養(yǎng)基中，可用于培養(yǎng)微生物，如：

（1）馬血清添加到培養(yǎng)基中用于支原體的培養(yǎng)。在《獸藥典》中，含馬血清的支原體培養(yǎng)基被用于獸用疫苗的支原體檢查。用KM2培養(yǎng)基(含馬血清)還可培養(yǎng)豬肺炎支原體。

（文獻來源：胡茂志 焦新安,等.豬肺炎霉形體單克隆抗體的制備與鑒定.《中國獸醫(yī)科技》 2004年12期）

（2）馬血清加入到固體和液體培養(yǎng)基中，可用于培養(yǎng)幽門螺桿菌。并且，和羊血清和牛血清比較，添加馬血清的培養(yǎng)基更易于分裝和保存。

（文獻來源：劉琳娜, 丁士剛, 張靜,等. 幾種培養(yǎng)幽門螺桿菌方法的比較[J]. 胃腸病學(xué), 2012, 017(004):240-241.）

3. 馬血清及激素可共同誘導(dǎo)建立家兔股骨頭缺血壞死的模型。

（文獻來源：洪嵩, 張?zhí)旌? 非創(chuàng)傷性股骨頭壞死模型的血液流變學(xué)及脂質(zhì)代謝[C]// 2009**屆貴州骨科論壇.）

二、注意事項

與胎牛血清一樣，馬血清在使用過程中也應(yīng)注意幾個原則：

1、避免反復(fù)凍融；

2、三步法解凍，及時分裝；

3、配制好的完全培養(yǎng)基在4℃儲存不要超過7天。

還有一個大家比較關(guān)心的問題，馬血清是否需要滅活？

我們都知道，胎牛血清由于特殊的采血時間（5-8月胎齡），牛胚胎體內(nèi)還沒有形成完整的補體系統(tǒng)，因而不需要采用熱滅活的手段對補體進行滅活。

而馬血清，在沒有特殊說明的情況下，一般采自成年馬匹。作為脊椎動物，成年馬也擁有完整的補體系統(tǒng)。

因而，如果所進行的實驗中，涉及補體相關(guān)內(nèi)容，建議大家在使用前對馬血清進行熱滅活，也可以直接購買商品化的滅活馬血清。一些比較成功的實驗案例中，所用到的馬血清，也是經(jīng)過熱滅活的。

相關(guān)實驗請參考：

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5111218/