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細(xì)胞培養(yǎng)中的抗生素究竟是敵是友？

2021-10-29 09:10來(lái)源：威正翔禹|締一生物

提到配制細(xì)胞培養(yǎng)基，你能想到啥？

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營(yíng)養(yǎng)成分和緩沖體系多數(shù)情況下都是必要的，但這抗生素，真的是必要的嗎？有了抗生素，細(xì)胞就無(wú)懼污染了嗎？


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關(guān)于抗生素在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的意義，一直都有很矛盾，不用細(xì)胞容易污染，一直用對(duì)細(xì)胞狀態(tài)也會(huì)有影響，到底該怎么辦？今天我們就來(lái)一探究竟。



抗生素對(duì)細(xì)胞的影響


很多同學(xué)養(yǎng)細(xì)胞的手藝，都是從師兄師姐那里「?jìng)鞒小箒?lái)的，由于沒(méi)有辦法做到絕對(duì)的無(wú)菌，所以從經(jīng)驗(yàn)角度出發(fā)，前輩們都會(huì)告訴剛開(kāi)始養(yǎng)細(xì)胞的同學(xué)，可以在配制培養(yǎng)基的時(shí)候，加入1%左右的雙抗，防止細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染（有些時(shí)候甚至出現(xiàn)離開(kāi)抗生素，細(xì)胞沒(méi)過(guò)幾天立馬就被污染的情況）。


這就造成一些小伙伴在培養(yǎng)基中「預(yù)防性添加抗生素」，其實(shí)圖的就是個(gè)心安，抱著「有了抗生素就不怕污染」的心態(tài)。但事實(shí)上，抗生素并不是「免死**」，真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟模踔翞E用還會(huì)適得其反。


這抗生素對(duì)細(xì)胞有什么影響呢？


早在十幾年前，就有很多報(bào)導(dǎo)指出β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素，對(duì)真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用[1]。并且這種抑制增殖作用在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯[2-3]。2017年，加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章，呼吁在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現(xiàn)抗生素（雙抗：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。其中有209個(gè)基因的表達(dá)發(fā)生了改變，特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。超過(guò)9,500個(gè)基因調(diào)控元件發(fā)生了變化，并且很多調(diào)節(jié)元件位于參與細(xì)胞分化，核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數(shù)量在龐大的細(xì)胞基因庫(kù)中不值一提，但這絕對(duì)不是一個(gè)應(yīng)該被忽略的事件。


雖然抗生素對(duì)真核細(xì)胞生長(zhǎng)的影響機(jī)制至今尚未明確，但是為了細(xì)胞更好的生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡量不要隨意使用。



參考文獻(xiàn)：

[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.


[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.


[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.


[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.





如何有效避免污染？


抗生素對(duì)細(xì)胞有一定傷害，但是不加抗生素又要怎樣避免實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)污染的狀況呢？


1、實(shí)驗(yàn)環(huán)境（包括培養(yǎng)箱內(nèi)部、冰箱、超凈臺(tái)）要進(jìn)行定期徹底的消毒，用消毒液（75%乙醇溶液、新潔爾滅等）擦拭地面墻面桌面等地方，不留衛(wèi)生死角；紫外線照射30分鐘以上。

2、定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺(tái)臺(tái)、桌面等地方。


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3、培養(yǎng)箱、水浴鍋的水槽要定期清潔，用支原體預(yù)防試劑處理。

4、細(xì)胞房實(shí)驗(yàn)要用專用的實(shí)驗(yàn)服：進(jìn)入細(xì)胞房正式實(shí)驗(yàn)前須換上專用防護(hù)服、專用鞋或鞋套。

5、實(shí)驗(yàn)廢料不在細(xì)胞房堆積，及時(shí)清理。

6、遵照細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作方法，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格無(wú)菌操作。


另外，選擇一款合格的實(shí)驗(yàn)試劑也很重要。就拿血清來(lái)說(shuō)，合格的血清產(chǎn)品，一定要有明確的檢測(cè)報(bào)告，指出微生物檢測(cè)情況。


以Ausbian血清為例：各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。

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Ausbian血清的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)

    1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。


    2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。


    3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號(hào)優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項(xiàng)目?jī)赡瓴恍钃Q批次，細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。


    4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會(huì)有多批次平行供應(yīng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專屬批號(hào)管理，保證供貨穩(wěn)定。


所有血清出廠前，均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控，每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》，包括：品名，貨號(hào)，批號(hào)，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查（細(xì)菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等）、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。


    5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報(bào)支持，具有完整的檢測(cè)報(bào)告，為各類項(xiàng)目的申報(bào)提供支持。（同時(shí)為血清VIP用戶在支原體檢測(cè)、方法學(xué)驗(yàn)證等方面，提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助。）


    6. 針對(duì)特殊科研項(xiàng)目，可提供3-5個(gè)平行批次，讓試驗(yàn)人有更多選擇空間。


    7. 為Ausbian血清提供免費(fèi)代儲(chǔ)存服務(wù)，為儲(chǔ)存空間不足的實(shí)驗(yàn)室提供可靠的血清倉(cāng)儲(chǔ)保護(hù)，按要求隨時(shí)發(fā)貨。


    8. Ausbian血清從出廠，到實(shí)驗(yàn)室，全程低溫冷鏈保護(hù)，確保血清無(wú)反復(fù)凍融。


    9. 免費(fèi)真品保障，每個(gè)血清瓶身加貼Viansaga?易破損防偽標(biāo)簽，Ausbian品牌真品保護(hù)，逢假必究，為實(shí)驗(yàn)室做好售后保障。


    10. 免費(fèi)無(wú)憂售后，所有實(shí)驗(yàn)室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開(kāi)始計(jì)算，一年之內(nèi)，血清在妥善保管、未開(kāi)封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無(wú)條件退貨或換貨的售后保障。


   11. 免費(fèi)專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬(wàn)個(gè)血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問(wèn)題梳理分析，解決方案參考。




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