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做細胞培養(yǎng)實驗?zāi)銘?yīng)該做到以下幾點

2020-09-25 15:35來源：威正翔禹|締一生物

做細胞培養(yǎng)實驗的實驗室越來越多，如果打算開展或者已經(jīng)開展的單位或者實驗室一定要做到以下幾點。

Ausbian特級胎牛血清.jpg

   

1、選擇正確的培養(yǎng)基

在養(yǎng)細胞之前，就要了解，你所養(yǎng)細胞的來源以及種類和名稱，查閱一定量的文獻，確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分，常用的細胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等，一些常見的細胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來培養(yǎng)，有的需要加入一定其他成分，這需要根據(jù)不同的細胞類型，查ATCC細胞庫或者查文獻，才能找到所需**培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細胞的**步。


2、了解細胞的生長習性

不同的細胞生長習性不同。如成纖維細胞是貼壁生長，有一定的密度依賴性，密度小可能會出現(xiàn)不增殖，狀態(tài)差的情況，接種密度大時則需要隔天傳代，頻繁傳代則影響細胞狀態(tài)；再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞，是懸浮生長的，傳代需離心棄去上清即可。總之，了解細胞生長習性，再加上正確的計數(shù)，才能掌握好傳代的密度。


3、選擇優(yōu)質(zhì)的血清

血清中含有細胞生長所必須的生長因子，作為哺乳動物細胞培養(yǎng)的附加物，血清的添加是十分重要的，因此，選擇優(yōu)質(zhì)的血清，是細胞養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵！


4、及時傳代和更換培養(yǎng)液

在細胞增殖到一定的密度后，要及時傳代，根據(jù)細胞的生長速度和密度，及時更換培養(yǎng)液。更換過勤，浪費培養(yǎng)液，更換不夠及時，則細胞狀態(tài)轉(zhuǎn)差，一般需隔天更換培養(yǎng)液，具體可根據(jù)所養(yǎng)細胞種類予以調(diào)整。


5、絕對的無菌意識

前面林林總總?cè)慷甲⒁夂昧耍绻麩o菌意識差，細胞中混入了微生物，則千里之堤潰于蟻穴，細菌的生長速度和破壞力，將迅速占領(lǐng)培養(yǎng)皿，破壞細胞結(jié)構(gòu)，有些初學(xué)者會在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗，但是，無菌意識不強，雙抗亦無法拯救你的細胞！


6、傾心的呵護，頻繁的觀察

做到以上幾點，就可以開始養(yǎng)你的細胞了，但是再次重申細胞嬌弱，在養(yǎng)細胞的過程中，難免會出現(xiàn)一些意想不到的問題，要想成功養(yǎng)好細胞，時時惦記它
，頻繁地觀察，初期一天觀察2次都不足為過，出現(xiàn)任何預(yù)料外的情況，及時處理，才能保障收獲一盤“漂亮”的細胞。