反復對血清凍融對細胞培養(yǎng)有害

實驗室一次用不完的血清會采取繼續(xù)冷凍的方式保存，凍融血清會對蛋白的活性有影響，如果是反復凍融的確會影響到細胞正常生長。

曾有研究發(fā)現(xiàn)，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大1，對于血漿，有報道在短時間內(nèi)反復凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。最重要的是一篇西北民族學院的文章，《反復凍融新生牛血清對促細胞生長效應的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線，根據(jù)公式t =T/A , A=log2Y/X計算細胞倍增時間（t為細胞倍增時間，Y為細胞峰值前1 d的細胞數(shù)，X為接種細胞數(shù)，T為細胞生長時間）。結(jié)果顯示：選用的三批新生牛血清在反復凍融28次時， 血清促細胞生長的**增殖量變化不大，均高于1×106/mL,但是血清促細胞生長的倍增時間在反復凍融20次時延長， 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數(shù)達到20次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結(jié)果列表，發(fā)現(xiàn)在凍融20次之前，細胞倍增時間延長2-3小時不等，20次時，則延長3-4小時。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進行測試。

國外有人對大鼠血清中的18種化學成分進行了檢測，發(fā)現(xiàn)反復凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內(nèi)。3總而言之，如果能避免牛血清的反復凍融，及時分裝，那是最理想的。如果在短時間內(nèi)有幾次反復凍融，也不必過于擔心。但是，對于胎牛血清，還有一個問題，是反復凍融增高了血清產(chǎn)生沉淀或渾濁的風險。因為血清在融化時，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產(chǎn)生沉淀。同時，如果血清內(nèi)含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4，等到血清再融化時，沉淀就顯現(xiàn)出來了。所以，血清的質(zhì)量也非常重要。

因此對血清反復凍融對細胞是有危害的建議如果幾次使用不完應盡量分裝使用。