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只用一招,簡單祛除細胞上的支原體!2019-09-02 09:37來源:威正翔禹|締一生物
細胞培養最怕支原體污染,但有一些被污染的細胞不能被丟棄時該怎么辦?今天小編把國際上慣用的一個小絕招教給你,簡單有效! 如何祛除細胞上的支原體污染? 據研究表明,約98%的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。支原體直徑約180~350nm,比細胞小很多,經低速離心與細胞分離。通過反復懸浮沖洗、離心,加上使用我們的Zell Shield?,即可在細胞培養四代以內有效地祛除支原體。 什么是Zell Shield?? Zell Shield?是一種鏈青霉素類復合抗生素, 對細胞影響很小,可以有效抑制細胞培養中的 支原體、細菌、霉菌、真菌等微生物增殖。 普通的鏈霉素、青霉素對支原體沒有效果。 那為什么Zell Shield?有效呢? 因為Zell Shield?是由Minerva公司生產的專門針對支原體的抗生素。 德國Minerva公司是由全球**的羅伯特·科赫研究所中分離出來的,專注于支原體、細菌的污染控制,尤其以支原體和軍團菌的祛除、檢測而聞名。Zell Shield?是Minerva公司的一項**產品,不但對細胞培養中的細菌、真菌、霉菌有效,更是對支原體的祛除有確切效果。 具體是怎么操作呢? 1.首先把被支原體污染的細胞消化下來, 放入離心管離心,棄上清。 再加入干凈的PBS懸浮沖洗細胞、 低速離心(300~500r/min)、棄上清, 反復三次。 這樣可祛除細胞表面60%~70%的支原體, 支原體還剩約30%~40%. 2.細胞加入含1%Zell Shield?的新鮮培養基, 傳代培養。 這時因培養基中Zell Shield?的抑制作用 細胞培養過程中, 雖然細胞增殖,但殘留的支原體無法增殖。 細胞需再次傳代時,把第二代細胞消化下來, 離心,棄上清。 加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清, 反復三次, 這時,細胞上殘留的支原體大約已剩余為最初污染量的10%左右。 3.細胞加入含1%Zell Shield?的新鮮培養基, 傳代培養。 需再次傳代時把第三代細胞消化下來, 離心,棄上清。 加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清, 反復三次, 可再次祛除60%~70%的殘余支原體, 通過沖洗、抑制、換液等操作, 細胞中支原體的殘留污染量大約只剩3%左右。 4.細胞加入含1%Zell Shield?的新鮮培養基, 傳代培養。 需再次傳代時把第四代細胞消化下來, 離心,棄上清。 加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清, 反復三次, 可再次祛除60%~70%的支原體, 此時,支原體殘留量大約已低于1%. 支原體的增殖亦有密度要求, 用Zell Shield?處理過四代的細胞, 即便撤掉Zell Shield?, 只要保證沒有新的支原體人為再次帶入, 原有支原體也無法再增殖, 隨著傳代,換液,支原體的老化、死亡, 細胞中的支原體污染基本就徹底解決了。 敲黑板,劃重點啦 1.每次傳代時,重復三次對細胞懸浮沖洗步驟非常重要,操作要正確、規范,以達**效果! 2.在培養基中加入1%Zell Shield?抑制支原體增殖! 3.使用安全的血清、培養基等試劑,不再有新的支原體加入! 做到以上三點即可確保祛除支原體污染。 Zell Shield?工作原理是什么? 支原體祛除劑Zell Shield?(培養基用) 是一種即用型鏈青霉素類的復合抗生素, 在培養基中1%的濃度 通過阻止原核生物DNA及蛋白的合成, 抑制細胞培養中遇到的 細菌、真菌、霉菌增殖, 更可以有效、精確地抑制支原體增殖, 且對細胞基本安全。 品名:支原體祛除劑Zell Shield?(培養基用) 生產商:Minerva Biolabs GmbH 生產地:德國 貨號:13-0050 規格:50mL/瓶 儲存溫度:-18℃ 使用注意事項:實驗室初次使用,注意分裝,分裝后的小包裝Zell Shield?仍-20℃避光冷凍保存,現配現用。 市場價格:電話詢價 貨期:大多數時間國內有現貨 訂貨熱線:400-166-8600 咨詢QQ :1580434811 官方網址:13851990668.com 產品引用文獻: (1)BennettT.A. et al.,(2014).Pharmacological profiles of acute myeloid leukemia treatments in patient samples by automated flow cytometry: a bridgeto individualized medicine.Clinical Lymphoma, Myeloma & Leukemia, 14(4):305-18. doi: 10.1016/j.clml.2013.11.006. (2)Cagno V. et al., (2017).In vitro anti-herpes simplex virus-2 activity of Salvia desoleana Atzei & V. Picci essential oil. PLoS One,12(2):e0172322. doi: 10.1371/journal.pone.0172322. (3)Carnesecchi J. et al., (2015).Estrogens Induce Rapid Cytoskeleton Re-Organization in Human Dermal Fibroblasts via the Non-Classical Receptor GPR30. PLoS One,10(3):e0120672. doi: 10.1371/journal.pone.0120672. |