大腸埃希菌O157的ISO方法解讀

大腸埃希菌O157作為食品致病菌，早就引起人類的注意。2001年，ISO發布了ISO 16654:2001食品和動物飼料微生物學—大腸埃希菌O157檢測的水平方法，對食品和飼料中的E.coli O157檢測，給出了標準方法。

O157是E.coli的血清型。我國標準要求在牛肉制品和生食果蔬制品中不得檢出。在ISO 16654:2001中，E.coli O157的檢測分為四步：

1）增菌。采用含新生霉素的改良型TSB肉湯，41.5℃孵育6h，再緊接著孵育12-18h；

2）分離和富集。需要采用針對O157的抗體包被的免疫磁珠；

3）檢出：采用CT-SMAC平板和另一款原理不同的選擇性分離瓊脂

4）驗證：對CT-SMAC平板上的山梨醇陰性菌落和第二款選擇性分離瓊脂上的E.coli O157典型菌落，通過吲哚試驗和E.coli O157抗血清的凝集試驗進行驗證。

增菌階段，ISO推薦用Modified tryptone soya broth，即改良型TSB肉湯，對此，HIMEDIA生產有Soyabean Bile Broth Base（貨號M1286）和新生霉素添加劑（貨號FD290），配方和ISO推薦的改良型TSB肉湯完全一致，可以采用。

對于CT-SMAC瓊脂，HIMEDIA也生產有相應培養基（貨號M1340，加添加劑，貨號為FD147），培養結果見下圖。O157為無色菌落。但不排除假陽性，如假單胞菌在此培養基中也可產生無色菌落。此時可進行氧化酶試驗，在5-10秒內觀察結果。假單胞菌為陽性，而O157為陰性。

同時，ISO 16654:2001也指出，存在山梨醇陽性的E.coli O157不會被CT-SMAC平板檢測到。因此推薦同時使用另外一款選擇分離培養基。此時可考慮HIMEDIA的另外一款O157選擇性瓊脂（顯色培養基），貨號為MV1575A，品名為HiCrome? EC O157:H7 Selective Agar Base,Modified，配合添加劑（貨號FD187）一起使用。其檢測效果見下圖。E.coli O157:H7能旺盛生長，菌落呈深紫色，而普通E.coli呈藍綠色。

培養基添加劑中的亞碲酸鉀能抑制氣單胞菌和普羅威登菌生長，新生霉素抑制革蘭陽性菌，月桂基硫酸鈉抑制伴隨的革蘭陽性菌群。

在驗證階段，ISO也提示，發現存在吲哚陰性的突變菌。因此，也可以考慮用qPCR或多種生化鑒定的方式進行驗證。