【系列2】胎牛血清RNA干擾了細胞培養外源性RNA

在細胞衍生exRNA特定miRNA的富集可能是由FBS的衍生的RNA污染造成的。

幾個觀察表明FBS的相關聯的RNA可能與exRNA的干擾分析。

首先，我們檢測到高水平的miR-122，在肝臟中大量表達，但未被發現在其他組織中的特定的miRNA的2,3，在作為單層或神經球（培養的神經膠質瘤細胞系的條件培養基圖1a）。考慮到缺少在成膠質細胞瘤腫瘤中的miR-122表達的4和培養的神經膠質瘤細胞（圖1a）中，我們合理化，這一發現可以通過任一異常有效的miR-122的分泌來解釋，或更可信，培養基作為主源這種miRNA的。實際上，的miR-122在神經膠質瘤細胞培養物中使用的新鮮無條件媒體高度豐富（圖1b），這表明在經調節的培養基中的大多數的miR-122的來自于培養基成分，而不是細胞分泌。另一具體微小RNA中，miR-451A，在不同細胞和組織中的血表示具有最高豐度2，在由各種細胞類型分泌的電動汽車被報告為最富集的miRNA 5 ,6 ，7 ，8 ，9 ，10 ，11 。與這些發現一致的是，我們發現的miR-451A在從在DMEM/10％vdFBS（生長U251和20/3膠質瘤單層培養物的條件培養基中分離的丸狀電動汽車富集圖1a）。

然而，當相同的細胞系在相同的葡萄糖濃度，但在無血清的神經球促進條件下培養，未在超速離心檢測的miR-451A（UC）粒料/exRNA級分（圖1a）。為了更好地理解不同培養基的貢獻，我們分離從新鮮無條件“單層培養基”總exRNAs（2D培養基含有DMEM/10％FBS），囊泡貧2D培養基（VD2D含有FBS的24小時后，UC），和“神經球介質”（3D介質，無血清），并使用定量RT-PCR測量的miR-451A水平。MIR-451A是豐富的2D介質，在VD2D介質略微減少，并且在3D介質（勉強檢測圖1b）。

值得注意的是，的miR-122和miR-451 VD2D媒體相對于所述粗2D介質中的水平降低到一個不同的程度，但不能完全消除。雖然該培養條件影響的RNA分泌的可能性不能被排除，這些研究結果表明，基于UC的囊泡耗盡不完全從FBS/培養基消除RNA和該FBS的相關聯的RNA可能導致錯誤的結果和解釋，如此前公布的miR-451A富集exRNA。

圖1：FBS衍生的RNA干擾exRNA和細胞RNA的RNA分析。