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解讀:血清融化三步法,讓血清更好用的背后秘密原理!2017-08-25 12:44
提起細胞培養中,牛血清的融化,大家首先想到的就是4℃過夜法。今天小威把國際上流行多年的『血清融化三步法』介紹給大家,讓你知道怎樣讓你的血清,通過合適的融化,事半功倍! 與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢?重點有二! 其一:關系到沉淀出現的幾率! 記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區別,你懂得!)試想,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產生沉淀的重要原因之一。 采用三步法,只要2.5個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節約了時間,而且**限度減少了血清沉淀出現的幾率。 血清融化過程中,蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白 其二:血清在培養細胞中,最重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中**限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4℃過夜需要大約10個小時(冰箱一般設2-8℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。哪個速度對保留活性更好?不言而喻! 下面,我們詳細解讀『血清的三步融化法』的步驟: 圖:剛從-28℃拿出的血清,是這個樣子的 融化血清準備 溫度:室溫 時間:100ml - 35分鐘 500ml - 90分鐘 1000ml - 100分鐘 或 溫度:15-20℃水浴(新接的自來水24℃上下) 時間:100ml - 5分鐘 500ml - 18分鐘 1000ml - 20分鐘 圖:這是最近Ausbian血清的大區經理周博,在天津血研所實驗室拍到的——實驗人員三步法化血清的圖片,為了節約時間,實驗人員采取的是**步20℃水浴18min的方法。(用現接的自來水放入冰凍的血清,即可達到20℃水浴的效果。一般實驗室沒有能制冷到20℃的水浴鍋) 融化血清第二步 溫度:20℃水浴(新接的自來水24℃上下) 時間:100ml - 15分鐘 500ml - 25分鐘 1000ml - 30分鐘 圖:第二步,仍舊是新接的自來水浴,25min 融化血清第三步 溫度:37℃水浴 時間:100ml - 20分鐘 500ml - 35分鐘 1000ml - 45分鐘 第三步,將血清置于37℃水浴鍋中進行融化,大約30nmin左右,血清就徹底融化,可以分裝了。 圖:大家看,使用三步法融化的血清十分清亮,養細胞的效果也是棒棒噠。 注意 1.在水浴過程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動,使血清混勻,但不要產生泡沫! 2.胎牛血清不推薦熱滅活。 3.此三步法適用于所有品牌、所有級別的進口或國產血清,均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細胞培養效果方面,得到不同程度的提高! 看到這里,你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢?其實,想快速得到高品質的血清,除了科學的融化方法,自身品質出眾的血清,完備的運輸冷鏈,貼心的售后服務,這些都是不可或缺的!締一生物國內總代Ausbian血清,澳洲進口胎牛血清,助力國內細胞培養實驗! |