細胞房支原體污染為何頻頻發生？

細胞房支原體污染頻頻發生的原因多種多樣，以下是對這些原因的詳細分析：

一、人為因素

不良操作習慣：實驗室人員在操作過程中未嚴格遵守無菌操作規范，如未穿實驗服、未戴口罩、未熏蒸操作臺等，這些行為都可能將支原體帶入細胞培養物中。支原體可以通過臟衣服、實驗室服裝、人在層流氣流附近的講話、人的頭皮、打噴嚏、咳嗽等途徑傳播。

交叉污染：實驗室人員在處理多個細胞系時，如果重復使用移液器、手套等實驗工具，而未進行充分的清潔和消毒，就可能導致支原體在不同細胞系之間的交叉污染。

二、設備因素

實驗器材污染：使用不潔凈的實驗器材，如培養瓶、移液管等，這些器材可能殘留有支原體，從而在細胞培養過程中引入污染。

設備維護不當：細胞培養所需的設備，如水浴鍋、振蕩培養箱、生物反應器等，如果維護不當或清潔不徹底，也可能成為支原體污染的來源。

三、環境因素

實驗室環境不潔凈：細胞培養需要在潔凈的環境中進行，如果實驗室環境不潔凈，存在大量的微生物污染，包括支原體，那么細胞培養物就很容易受到污染。

氣溶膠污染：在層流氣流中工作時，說話或移液時產生的氣溶膠也是造成污染的主要原因之一。這些氣溶膠中含有大量的微生物，包括支原體，它們可以在細胞傳代過程中進入培養基或從空氣中進入細胞培養物。

四、細胞培養基和血清因素

培養基污染：培養基在制備或保存過程中可能受到支原體的污染。尤其是粉末培養基，由于技術條件限制，支原體可能通過粉末培養基進行傳播。

血清污染：血清是細胞培養中常用的添加物，但如果血清本身受到支原體的污染，那么細胞培養物也會受到污染。血清一般是在高壓滅菌后才添加到培養基中的，但即使經過高壓滅菌，也無法保證血清完全無污染。

五、支原體本身的特性

支原體大小：支原體的直徑一般在0.1微米左右，而我們平時使用的除菌過濾一般孔徑為0.22微米，這種孔徑的過濾器只能起到過濾細菌的作用，多數支原體是無法被過濾掉的。

支原體種類多：已發現的支原體品種有100多種，但根據國內外相關研究發現，大約有二十多種支原體能污染細胞，這使得支原體污染的防控更加復雜。

六、預防措施

為了預防細胞房支原體污染的發生，可以采取以下措施：

嚴格控制環境污染：保持實驗室環境的潔凈度，定期清潔和消毒實驗室設備和器材。

嚴格實驗操作：實驗室人員應嚴格遵守無菌操作規范，穿戴整潔的實驗服和口罩，避免在層流氣流附近講話、打噴嚏或咳嗽等行為。

使用一次性實驗器材：在處理多個細胞系時，應使用一次性移液器、手套等實驗器材，避免交叉污染。

定期檢測支原體：定期對細胞培養物進行支原體檢測，及時發現并處理污染問題。

加入細胞支原體祛除劑：在不影響實驗結果的前提下，可在細胞培養基中加入適量的ZellShield?，以抑制支原體的生長。ZellShield?可作為常規添加劑直接用于培養基中，保護體外培養的細胞免受各種常見污染物的侵害。ZellShield?用于保護細胞培養物免受各種常見污染物的侵害，如細菌、真菌、酵母和支原體，這種保護作用是基于新型抗生素與大環內酯的組合，抑制細菌DNA和蛋白質的合成，沒有明顯的副作用。不需要使用常規抗生素，如青霉素、鏈霉素、制霉菌素等。

綜上所述，細胞房支原體污染頻頻發生的原因涉及人為因素、設備因素、環境因素、細胞培養基和血清因素以及支原體本身的特性等多個方面。為了預防支原體污染的發生，需要采取綜合性的防控措施。