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細胞傳代消化的問題2024-08-09 17:13
在消化的過程中,加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是每個細胞的生長狀態(tài)是不一樣的,細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁較松,這一點往往容易被忽視。對于較難消化或對胰酶敏感的細胞,可以采用四步消化法,具體操作如下: 第1步:不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。 第2步:加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,把貼壁不牢固的細胞吹打下來,再用培養(yǎng)基清洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。(可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),與后面胰酶消化過的細胞生長狀態(tài)進行對比觀察即可知道該細胞對胰酶的敏感度。) 第3步:吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入2mIPBS潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶于干凈EP管備用,加入新培養(yǎng)基吹打2-3遍后吸取懸液于離心管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合(也可以傳入新瓶培養(yǎng),以便與后面及前面的做對比) 第4步:把第三步吸出來的胰酶重新加入瓶內(nèi),繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞(也可以用新的胰酶繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨),立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打,懸液傳入新瓶培養(yǎng)。 將細胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以**程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài),不成片不連體。 |