產(chǎn)品目錄
  • 細胞培養(yǎng)進口血清
    進口胎牛血清
    進口新生牛血清
    進口豬血清
    馬血清
  • 支原體檢測盒及標準品
    常規(guī)PCR檢測試劑盒
    熒光定量PCR檢測（qPCR法）
    支原體DNA提取
    靈敏度標準品（方法驗證用）
    特異性標準品（方法驗證用）
    PCR定量標準品（可用于方法驗證）
  • 支原體祛除試劑
    細胞中支原體祛除
    環(huán)境支原體祛除
    水槽支原體祛除
  • 干細胞培養(yǎng)基
  • DNA/RNA污染祛除
    DNA/RNA污染祛除試劑
    DNA污染監(jiān)測
  • RNA病毒研究試劑
    RNA病毒檢測試劑盒
    病毒RNA提取
  • PCR儀器及配套產(chǎn)品
    DNA污染監(jiān)測祛除
    PCR/qPCR儀性能檢查
    PCR試劑
    PCR試劑盒
    PCR預混液（凍干粉）
    熱啟動聚合酶MB Taq DNA
  • 微生物PCR檢測
    食品檢測類產(chǎn)品
    食品微生物檢測
    細菌PCR檢測
歡迎來到 威正翔禹|締一生物官方網(wǎng)站|咨詢熱線：400-166-8600
咨詢熱線
400-166-8600

產(chǎn)品目錄
  • 細胞培養(yǎng)進口血清
    進口胎牛血清
    進口新生牛血清
    進口豬血清
    馬血清
  • 支原體檢測盒及標準品
    常規(guī)PCR檢測試劑盒
    熒光定量PCR檢測（qPCR法）
    支原體DNA提取
    靈敏度標準品（方法驗證用）
    特異性標準品（方法驗證用）
    PCR定量標準品（可用于方法驗證）
  • 支原體祛除試劑
    細胞中支原體祛除
    環(huán)境支原體祛除
    水槽支原體祛除
  • 干細胞培養(yǎng)基
  • DNA/RNA污染祛除
    DNA/RNA污染祛除試劑
    DNA污染監(jiān)測
  • RNA病毒研究試劑
    RNA病毒檢測試劑盒
    病毒RNA提取
  • PCR儀器及配套產(chǎn)品
    DNA污染監(jiān)測祛除
    PCR/qPCR儀性能檢查
    PCR試劑
    PCR試劑盒
    PCR預混液（凍干粉）
    熱啟動聚合酶MB Taq DNA
  • 微生物PCR檢測
    食品檢測類產(chǎn)品
    食品微生物檢測
    細菌PCR檢測

細胞傳代消化的問題

2024-08-09 17:13

在消化的過程中，加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是每個細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁較松，這一點往往容易被忽視。對于較難消化或對胰酶敏感的細胞，可以采用四步消化法，具體操作如下:

第1步:不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，(這是前奏，目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。

第2步:加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，把貼壁不牢固的細胞吹打下來，再用培養(yǎng)基清洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。(可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，與后面胰酶消化過的細胞生長狀態(tài)進行對比觀察即可知道該細胞對胰酶的敏感度。)

第3步:吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入2mIPBS潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶于干凈EP管備用，加入新培養(yǎng)基吹打2-3遍后吸取懸液于離心管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以便與后面及前面的做對比)

第4步:把第三步吸出來的胰酶重新加入瓶內(nèi)，繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞(也可以用新的胰酶繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨)，立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打，懸液傳入新瓶培養(yǎng)。

將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以**程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。