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RT-PCR和real-time RT-PCR有何區別?

2024-01-04 16:29
文章附圖

PCR技術隨著時間的發展,分裂變化了很多種,今天分享的就是RT-PCR和real-time RT-PCR兩種的區別和應用。


RT-PCR

RT-PCR被稱為逆轉錄 PCR(reverse transcription PCR)或反轉錄PCR,結合了逆轉錄和聚合酶鏈式反應兩個步驟,用于在實驗室中復制和擴增特定的RNA序列。


逆轉錄

聚合酶鏈式反應


RT-PCR原理:

逆轉錄(Reverse Transcription): RT-PCR的**步是將RNA轉錄成相應的DNA。這個步驟涉及到逆轉錄酶(例如,逆轉錄酶或M-MLV逆轉錄酶),它能夠將RNA模板轉錄成相應的互補DNA鏈。

PCR(Polymerase Chain Reaction): 在逆轉錄之后,產生的DNA(cDNA)成為PCR的模板。PCR利用DNA聚合酶(例如,Taq聚合酶)將目標DNA序列反復復制,通過循環的加熱和降溫過程,每個循環產生兩倍的DNA。這樣,目標序列得以大量擴增。

RT-PCR操作步驟

RT-PCR應用:

主要用于研究基因表達、檢測RNA病原體、檢測RNA病毒等。逆轉錄的過程將RNA轉錄成cDNA,后續使用PCR進行擴增。


real-time RT-PCR

real-time RT-PCR的中文名稱是實時逆轉錄聚合酶鏈反應,是一種結合了逆轉錄(RT)和實時聚合酶鏈式反應(qPCR)的技術,用于從RNA樣本中合成相應的cDNA,并在逆轉錄的同時實時監測和定量擴增特定的RNA序列。

圖片


應用:

實時RT-PCR常用于研究基因表達的定量水平、檢測和定量RNA病毒、評估病原體感染等。它可以提供實時、定量的結果,并且能在PCR反應過程中動態監測目標核酸的變化。