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支原體CCU計數(shù)法與CFU定量法的比較

2023-11-03 13:55

在制藥和臨床領(lǐng)域，支原體定量是采用CCU計數(shù)法。即用“顏色改變單位(CCU) ”對支原體進(jìn)行定量。該方法主要是將支原體菌液10倍系列稀釋，然后接種在含酚紅的支原體肉湯培養(yǎng)基中，36°C±1°C 培養(yǎng)7～14天。使培養(yǎng)基變色的最高菌液稀釋度定為1ccu/ml。

而在制藥領(lǐng)域，用PCR/qPCR方法對產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢查時，要求檢測方法的檢測限達(dá)到10CFU/ml。CFU即菌落形成單位，它代表著支原體在瓊脂培養(yǎng)基上的菌落數(shù)量，這是另外一種定量法。

這兩種定量法是否具有可比性？在2020年2月第4期的《衛(wèi)生檢驗雜志》上，一篇名為《支原體菌落形成單位與顏色改變單位定量關(guān)系研究》的論文報告了兩種方法比較的結(jié)果。

在該研究中，作者用A8培養(yǎng)基培養(yǎng)解脲支原體（ATCC 33175）48小時，用支原體培養(yǎng)基培養(yǎng)人型支原體（ATCC 23114）72小時，用SP4培養(yǎng)基培養(yǎng)肺炎支原體（ATCC 29342）6天，然而觀察菌落的生長情況。

同時，作者將菌株凍干粉復(fù)溶后進(jìn)行梯度稀釋，接種到相應(yīng)肉湯中。為降低誤差，作者對菌液采取了5倍系列稀釋，而非10倍。當(dāng)培養(yǎng)至肉湯顏色不再變化時，最高稀釋倍數(shù)的菌液濃度即為1ccu/ml，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)回算出菌液原液的濃度。

在進(jìn)行CFU計數(shù)時，作者發(fā)現(xiàn)，典型支原體菌落的直徑是15mm~300mm。其中，人型支原體和肺炎支原體的菌落可以肉眼識別，而解脲支原體的菌落直徑只有15mm~60mm，需要借助低倍顯微鏡才能看到并計數(shù)。

作者重復(fù)了10次，結(jié)果顯示，對于這3株支原體，CCU計數(shù)較為穩(wěn)定，CFU計數(shù)則存在一定的波動。對于解脲支原體，CCU與CFU二者的計量結(jié)果接近，無顯著差異；而對于人型支原體和肺炎支原體，CFU計量數(shù)值略高于CCU計量數(shù)值，有顯著差異。

由于支原體在肉湯生長比瓊脂中要快，因此實際工作中CCU計數(shù)更為常見。作者認(rèn)為，解脲支原體菌落較小，不容易計數(shù)，因而標(biāo)準(zhǔn)差較高。10倍稀釋對CCU計量的結(jié)果會造成一定誤差，因為實驗中培養(yǎng)基變色的最高稀釋度往往并不是能夠變色的最高稀釋度。降低稀釋倍數(shù)會減少誤差，但是會增加工作量。

在該實驗中，作者給出了三個菌株10次試驗的全部數(shù)據(jù)，因而可對CCU計數(shù)與CFU定量的結(jié)果進(jìn)行比較，明確二者之間的關(guān)系。