挑選胎牛血清為什么要對(duì)內(nèi)毒素特別關(guān)注？- 威正翔禹

有些同學(xué)經(jīng)常看締一生物文章會(huì)發(fā)現(xiàn)經(jīng)常說(shuō)在選購(gòu)血清的時(shí)候，一定要關(guān)注血清的“內(nèi)毒素指標(biāo)”，這是為什么呢？挑選胎牛血清的時(shí)候?yàn)槭裁匆獙?duì)內(nèi)毒素特別關(guān)注呢？本篇文章締一生物小助手就跟大家詳細(xì)說(shuō)說(shuō)。

內(nèi)毒素含量也是劃分血清等級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)之一，內(nèi)毒素含量越低的血清，級(jí)別就越高，以胎牛血清為例：

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清。

(目前，由于同一廠(chǎng)家，不同批次的血清，內(nèi)毒素?cái)?shù)值也可能有較大差異，因此很多血清廠(chǎng)家在名稱(chēng)上已不注明級(jí)別。但使用者仍可通過(guò)檢測(cè)報(bào)告，自行甄別挑選。)

　　那這血清中內(nèi)毒素的高低對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)有啥影響啊？為什么選血清要選內(nèi)毒素含量低的呢？

　　所以今天我們就來(lái)聊聊，細(xì)胞培養(yǎng)中血清的內(nèi)毒素問(wèn)題。

1、人體對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素極為敏感

　　極微量（1-5ng/kg，而1ng≈2.5EU）內(nèi)毒素就能引起體溫上升，發(fā)熱反應(yīng)持續(xù)約4小時(shí)后逐漸消退。

　　自然感染時(shí)，因革蘭氏陰性菌不斷生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)伴有陸續(xù)死亡、釋出內(nèi)毒素，故發(fā)熱反應(yīng)將持續(xù)至體內(nèi)病原菌完全消滅為止。

　　內(nèi)毒素引起發(fā)熱反應(yīng)的原因是內(nèi)毒素作用于體內(nèi)的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，使之產(chǎn)生IL-1、IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子作用于宿主下丘腦的體溫調(diào)節(jié)中樞，促使體溫升高發(fā)熱。

　　由于內(nèi)毒素是細(xì)菌死亡裂解或自溶引起的，因此環(huán)境中大量存在內(nèi)毒素。但是如果在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，出現(xiàn)了大量?jī)?nèi)毒素，而細(xì)胞要用于某些疾病的治療，回輸人體，這是萬(wàn)萬(wàn)不行的。

2、內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響

　　細(xì)胞遺傳代謝的影響

　　此前，有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，來(lái)觀察內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響，記錄的影響包括：刺激白細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細(xì)胞，以及通過(guò)極低水平（低于1 ng/mL）的內(nèi)毒素抑制鼠類(lèi)紅細(xì)胞集落形成等一系列指標(biāo)。

　　隨后，發(fā)表了許多關(guān)于內(nèi)毒素對(duì)體外細(xì)胞功能和生長(zhǎng)影響的論文。

Morris等人發(fā)現(xiàn)（1），只需暴露 6 小時(shí)，低至 0.5 ng/mL 的內(nèi)毒素水平可以增加馬腹膜巨噬細(xì)胞中IL-6的產(chǎn)生。Mattern等人發(fā)現(xiàn)（2）， 100 ng/mL 內(nèi)毒素可以刺激人類(lèi) T 細(xì)胞的增殖及其淋巴因子的產(chǎn)生，但這種刺激需要與先前暴露于內(nèi)毒素的單核細(xì)胞直接物理接觸。Sibley等人報(bào)道，10 到 200 ng/mL 內(nèi)毒素刺激鼠 B 細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系 (70Z/3) 完成 IgM 的產(chǎn)生，然后在細(xì)胞表面表達(dá)（3）。

　　從現(xiàn)有的研究可以看出，內(nèi)毒素對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)影響還是很大的：

　　改變細(xì)胞外形

　　活化細(xì)胞，產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)

　　抑制酶活性

　　抑制人工受精的成功率等

　　血清中內(nèi)毒素含量過(guò)高，更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康”，造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。所以要盡量選擇內(nèi)毒素低的血清。

　　對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

　　內(nèi)毒素會(huì)加速細(xì)胞衰老、凋亡，細(xì)胞提前死亡，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生波動(dòng)。

　　參考文獻(xiàn)：

1.Morris,D.D., Crowe, N., Moore, J.N.and Moldawer, L.L. Endotoxin-Induced Production ofInterleukin 6 by Equine Peritoneal Macrophages In Vitro. Am. J. Vet. Res.53:1298-1301 (1992).

2.Mattern, T.,Thanhauser, A., Reiling, N.,Toellner, K., Duchrow, M., Kusumoto, S.,Rietschel,E.T., Ernst, M., Brade, H.,Flad, H.D. and Ulmer, A.J. Endotoxin and Lipid A StimulateProliferation of Human T Cells In the Presence of Autologous Monocytes. J.Immunol. 153:2996-3004(1994).

3.Sibley, C.H.,Terry, A. and Raetz, C.R.H.Induction of K Light Chain Synthesis in 70Z/3 BLymphoma Cells by Chemically Defined Lipid A Precursors. J. Biol. Chem.263:5098-5103 (1988).

3、選擇內(nèi)毒素低的優(yōu)質(zhì)血清

　　一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞或組織培養(yǎng)過(guò)程中內(nèi)毒素污染源通常來(lái)自于血清、培養(yǎng)液及外加藥物配制用水等。

　　所以選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清就顯得尤為重要。締一生物是Ausbian血清國(guó)內(nèi)總代理，進(jìn)口的澳洲血清，助力國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)！了解更多Ausbian血清，歡迎訪(fǎng)問(wèn)締一生物官網(wǎng)：http://www.dyshengwu.com/?。