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淺談qPCR檢測(cè)中「內(nèi)參」的意義

2022-12-26 17:05作者：締一生物



實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)

qPCR主要是利用插入性染料或熒光探針，人們可以通過(guò)監(jiān)控PCR過(guò)程中的熒光強(qiáng)度比較多個(gè)樣品的DNA水平。

圖片


一、內(nèi)參的意義

qPCR本質(zhì)就是測(cè)定樣品中某個(gè)模板的起始量ct值。但在實(shí)際操作過(guò)程中，由于之前DNA提等步驟，各個(gè)步驟存在不同的效率，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響，每個(gè)樣本的Ct值并無(wú)法真實(shí)反映每個(gè)樣品中初始模版的絕對(duì)量，這就使得我們無(wú)法對(duì)不同處理的樣本進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。因此，我們需要一個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每一個(gè)樣本進(jìn)行校正，排除其他無(wú)關(guān)因素帶來(lái)的的影響。

二、什么是內(nèi)參

內(nèi)控(內(nèi)參，Internal Control)，也就是內(nèi)部參照測(cè)量，也叫內(nèi)部控制。使用內(nèi)參的目的是便于在分析過(guò)程中，將不同樣品的起始量做均一化處理。內(nèi)參通常選擇在不同組織中有穩(wěn)定表達(dá)量或不受實(shí)驗(yàn)處理影響的基因，在每個(gè)樣品中的表達(dá)量不發(fā)生變化，比如管家基因（house-keeping gene）。以小鼠為例，常用的內(nèi)參有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等，有時(shí)也可以用基因組DNA做內(nèi)參。

但需要注意的是，現(xiàn)在也有觀點(diǎn)認(rèn)為，這些基因在不同組織中豐度也不同，例如GAPDH，在線粒體含量高的組織中豐度高。有時(shí)候，不同的研究實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的內(nèi)參。一些文章在發(fā)表時(shí)，審稿人也會(huì)要求使用兩個(gè)內(nèi)參加以證實(shí)。

三、MB中的內(nèi)參

MB Venor?Gem qEP，用經(jīng)典的qPCR方法檢測(cè)樣品中是否含有支原體，其中也會(huì)用到內(nèi)參（內(nèi)控），可以在對(duì)支原體檢測(cè)的樣品做均一化處理，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定。

MB Venor?Gem qEP

德國(guó)原裝進(jìn)口，產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

3.高靈敏度，檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4.相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測(cè)。

       威正翔禹/締一生物科國(guó)內(nèi)總代德國(guó)Minerva-Biolabs微生物污染控制系列，德國(guó)MB支原體檢測(cè)/祛除試劑盒,DNA污染祛除試劑,支原體PCR/qPCR定量試盒等產(chǎn)品。了解更多產(chǎn)品信息請(qǐng)繼續(xù)瀏覽締一生物官網(wǎng)：www.dyshengwu.com。