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干貨分享:細胞轉染全攻略(上)2022-05-27 18:39來源:威正翔禹|締一生物
細胞實驗/ 轉染 定義:細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。 分類: 按轉染途徑可分為:細胞轉染分為物理介導、化學介導和生物介導三類。 按轉染結果可分為:瞬時轉染和穩定轉染 應用:在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中。 總結:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。 1 不同轉染途徑的比較 1.物理介導:電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例。 2.化學介導:方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。 3.生物介導:方法有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。 理論上,最理想的細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術,目前看來,雖然轉染效率最高、細胞毒性低,但整個過程比較復雜復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性。 因此,無論采用哪種轉染技術,想要獲得**的轉染結果,都需要對轉染條件進行一定的優化。 影響轉染效率的因素很多,從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態,到轉染方法的操作細節,都需要考慮。 三種轉染方法的優劣都給大家準備好了,有需要的同學可以截圖保存。 2 不同轉染結果的比較 瞬時轉染(transient transfection) 外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24~72h小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統和熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。 穩定轉染(Stable transfected) 外源DNA既可以整合到宿主細胞中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記。如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。 血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻:
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