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關于血清沉淀的那些疑問

2022-05-07 12:25來源:威正翔禹|締一生物


細胞培養過程中的血清沉淀


在日常實驗過程中,一些同學或多或少都會遇到血清出現沉淀的情況。那么問題來了:


血清中的沉淀是什么?

這些沉淀是如何產生的?

沉淀對細胞培養會造成影響嗎?

如何減少血清沉淀?


如果你也關心這些問題,那就跟著我們一起,來到今天的血清科普小課堂吧,幫你一篇理清血清沉淀的各種問題!



細胞培養中

血清沉淀從何而來?


一般來說,血清沉淀的成分可以簡單分為以下幾種:


1、纖維蛋白:最常見的體積比較大的沉淀物,達 1-2mm,肉眼可見。因為一些血清在收集和快速處理過程中,存在纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)處于溶解狀態,但經過濾分裝后,就會在瓶中凝結出現纖維蛋白的沉淀。


2、磷酸鈣:會使血清出現渾濁的一種沉淀物,并且在 37℃ 培養時出現增加。這類沉淀物鏡下觀察是一個小黑點,由于布朗運動,它們看上去仿佛可以運動,因此常被誤認為是微生物污染。


3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質:也是血清中出現沉淀物的常見原因。



細胞培養中

血清沉淀有何影響?


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血清沉淀會影響細胞生長嗎?

一般情況下,沉淀物不會影響細胞培養,但如果細胞對于營養物質有特殊需求,沉淀物中的成分不能被細胞吸收,可能會引起細胞長勢較差。

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血清沉淀會影響細胞實驗嗎?

會影響血清過濾。一些特殊實驗中,需要對細胞培養基進行過濾,如果血清中出現大量的沉淀物,混入培養基中,會導致過濾孔被堵塞,影響過濾效果。

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血清沉淀導致細胞污染嗎?

一般情況下,正常的沉淀物不會導致細胞污染。


但多數情況下,血清沉淀會對我們判斷細胞是否出現污染造成困擾。


絮狀沉淀容易和真菌、細菌混淆;磷酸鈣沉淀引起的小黑點容易與支原體污染混淆。

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細胞培養中

血清沉淀從何而來?


剛出廠的血清,應該是澄清透明的,為了保證品質,血清會儲存在-20℃的環境中。如果運輸過程中,出現了溫度忽高忽低,反復凍融的情況,就容易析出大量沉淀。


另外,不正確的解凍方法也會引起血清產生的大量沉淀。


細胞培養中

如何減少血清沉淀?


1、正確的運輸溫度:運輸過程中,要嚴格-20℃低溫,避免反復凍融。


2、使用正確的融化方法:在使用時,正確的解凍方法也很重要,這里推薦使用國際上通用的“三步法”解凍。


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需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應先轉移至-20℃冰箱中過渡。


一次解凍后,分裝至無菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。


3、使用正確的儲存方式:長期儲存在 2-8℃或在室溫下放置時間過長,都會引起沉淀,建議配制好的完全培養基在4℃冰箱中存放不要超過7天,血清分裝好后-20℃儲存。


4、特殊的處理:γ射線照射與熱滅活也容易引起沉淀析出,因此要注意射線照射劑量以及熱滅活方法(40℃水浴加熱20分鐘即可)



細胞培養中

如何去除沉淀?


如果要除去血清中的血清,可以將血清分裝至無菌離心管中,400g 離心,留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞,因此不建議用過濾的方法。


血清品質


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沉淀不是檢驗血清的硬指標,但為了實驗準確、實驗美觀、實驗便利,還是應該盡量減少沉淀的產生。掌握正確的血清解凍、使用方法,再加上一款品質穩定的優秀血清,對于細胞實驗來說,至關重要。


正確的使用方法與優質的血清,二者缺一不可。


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