透析胎牛血清的妙用

血清是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常用的生物試劑，市面上有很多種類(lèi)的血清，今天就來(lái)給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。

透析胎牛血清是采用透析的方法，過(guò)濾去除10KD以下的小分子（如氨基酸、核苷：次黃嘌呤和胸腺核苷等、膽固醇等），而保留血清中的大分子成分，因而可用于一些特定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，比如：需要避免細(xì)胞培養(yǎng)基中一些小分子干擾的實(shí)驗(yàn)。

那么，透析胎牛血清具體適用于實(shí)驗(yàn)中有哪些常見(jiàn)場(chǎng)景？我們來(lái)詳細(xì)講講。

使用放射性標(biāo)記小分子，對(duì)生物合成過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以研究蛋白質(zhì)等大分子的生化性質(zhì)、合成、加工、細(xì)胞內(nèi)傳送、分泌和降解過(guò)程。這時(shí)，常將細(xì)胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標(biāo)記氨基酸（如35S標(biāo)記的蛋氨酸或半胱氨酸）的培養(yǎng)液中進(jìn)行標(biāo)記。

為避免外源未標(biāo)記的氨基酸的干擾，這時(shí)所用的血清就是透析胎牛血清，不含蛋氨酸和半胱氨酸，基礎(chǔ)培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。

這種方法常見(jiàn)于生化代謝調(diào)控與疾病的機(jī)理研究。其他常見(jiàn)標(biāo)記物包括14C標(biāo)記的絲氨酸、亮氨酸、纈氨酸或32P標(biāo)記的焦磷酸，這時(shí)培養(yǎng)液中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清都要求不含有這種小分子。

另一種需要用到透析胎牛血清的情況是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株的篩選。

最常見(jiàn)的基因工程用細(xì)胞株是二氫葉酸還原酶缺陷型（DHFR-）的CHO細(xì)胞。

CHO（DHFR-）細(xì)胞由于不含DHFR，因而只能在含有胸苷、甘氨酸和次黃嘌呤的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng)。若將DHFR基因?qū)脒@種缺陷型細(xì)胞，則細(xì)胞能在不含這三種分子的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。同時(shí)，加入氨甲喋呤（MTX）可刺激DHFR基因大量表達(dá)，與之一同轉(zhuǎn)染的外源基因就能大量表達(dá)，因而可以獲得人們所需的基因工程藥物。類(lèi)似的情況也見(jiàn)于雜交瘤細(xì)胞的篩選。

這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等，也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分，參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。

采用報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（常見(jiàn)熒光素酶作為報(bào)告基因）進(jìn)行基因調(diào)控的研究時(shí)，為避免特定外源小分子（如激素等）作為基因激動(dòng)劑的干擾，即需要透析胎牛血清來(lái)培養(yǎng)基因轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞。

Ausbian透析胎牛血清