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技術(shù)專欄

培養(yǎng)細(xì)胞時的細(xì)菌檢測

2021-03-29 15:25來源：威正翔禹|締一生物

細(xì)胞培養(yǎng)是生物醫(yī)學(xué)研究的常見操作，其中避免細(xì)菌污染是重要一環(huán)。對于生命科學(xué)實驗室，早期就檢查培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在細(xì)菌污染，對于解決細(xì)胞污染問題，是一個合理的選擇。

據(jù)估計，高達(dá)5%的細(xì)胞培養(yǎng)物發(fā)生過細(xì)菌污染，并且缺乏肉眼可見的細(xì)菌污染跡象，如渾濁、培養(yǎng)基突然變色(酚紅)或出現(xiàn)微生物顆粒。此外，細(xì)菌可對標(biāo)準(zhǔn)抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現(xiàn)出耐藥性，并直接影響細(xì)胞代謝、生長和分化。因此，采用一款快速、靈敏、可靠的細(xì)菌檢測試劑盒，就顯得尤為必要。

德國MB公司專門設(shè)計的細(xì)菌PCR檢測Kit可以直接檢測細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)衍生的生物制劑和細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)菌污染。下面小編介紹一下。

一、產(chǎn)品信息

培養(yǎng)細(xì)胞時的細(xì)菌檢測1.jpg

二、產(chǎn)品描述

該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。

該試劑盒針對細(xì)菌16S rRNA基因高度保守區(qū)。根據(jù)序列一致性，可至少檢測污染細(xì)胞常見的45種細(xì)菌屬，具體如下：

放線菌Actinomyces

芽孢桿菌Bacillus

腸球菌Enterococcus

埃希氏桿菌Escherichia

梭菌Fusobacterium

克雷伯氏菌Klebsiella

乳酸桿菌Lactobacillus

微球菌Micrococcus

分枝桿菌Mycobacterium

假單胞菌Pseudomonas

卟啉單胞菌Porphyromonas

普氏菌Prevotella

沙門氏菌Salmonella

沙雷氏菌Serratia

軍團(tuán)菌Legionella

葡萄球菌Staphylococcus

鏈球菌Streptococcus

消化鏈球菌Peptostreptococcus

該試劑盒靈敏度達(dá)到100個基因組拷貝/PCR反應(yīng)。

說明：該試劑盒只用于科研，不用于工業(yè)QC。

三、試劑盒包括：

凍干型PCR mix：含引物/核苷酸/內(nèi)控對照DNA /熱啟動聚合酶；

復(fù)溶緩沖液；

凍干型陽性對照DNA；

PCR級水。

四、樣本處理

樣本不用提DNA，只需熱滅活（95 °C 5分鐘）；

樣本需不含抗生素，如含抗生素，則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少一代后再檢測。

五、反應(yīng)體系

25μl反應(yīng)體系：含20 μl PCR Mix和5μl模板。

六、結(jié)果判定

PCR結(jié)束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結(jié)果如下圖所示。

圖. 電泳分析結(jié)果。左側(cè)為內(nèi)控對照條帶，在140bp，用于排除假陰性。如有內(nèi)控條帶，則顯示PCR反應(yīng)正常，樣本中無PCR抑制成分。右側(cè)為目的條帶，在467bp左右。如有目的條帶，則提示有細(xì)菌污染。

七、產(chǎn)品引用文獻(xiàn)

Simonsen ?. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.