制藥、科研與臨床檢查支原體的區別

支原體是一種大小在0.1~0.3μm的原核生物，在自然界廣泛分布，迄今已發現150多種，其中90多種可寄生于人、動物、植物等真核細胞并大量繁殖。

在科研領域，細胞體外培養和細胞學實驗是常見的實驗室操作，需定期對細胞培養上清及培養基等進行支原體的監測，以避免支原體污染細胞和干擾實驗。

在從事疫苗、重組蛋白、單克隆抗體生產的生物制藥行業，由于采用了大規模的細胞培養工藝，同樣需要對工作細胞、檢定細胞及生物制品進行支原體的檢查，以達到藥典限定的標準。與之類似的，干細胞治療、CAR-T免疫治療等，也同樣可歸結到制藥領域。

還有一類領域是臨床。由于有些支原體會造成人體或牲畜疾病，因此當懷疑有感染癥狀時，也需要進行支原體檢查，以確診后對癥下藥。常見的致病支原體有肺炎支原體（引發人的呼吸道感染）、解脲脲原體和人型支原體（引發人的泌尿生殖系感染）以及牛支原體（引發小牛肺炎）等。

那么這三個領域在支原體檢查方面有什么區別呢？

在科研領域，由于細胞培養基中含有牛血清，營養豐富，支原體在里面很容易繁殖。一旦污染，則支原體的密度較高。因此，科研領域的支原體檢測，對于方法的靈敏度要求不高。PCR、DNA染色法、熒光素酶法都是常見的檢測方法。

與科研領域不同，制藥領域對支原體檢查方法的要求較高。傳統藥典方法為培養法和DNA染色法。但由于時間較長，近年又興起支原體的快檢方法，以 qPCR和PCR方法為代表，只要其特異性、靈敏度和耐用性都能達到歐洲藥典的要求，就能替代傳統藥典方法，用于內部質檢和放行檢測。

圖. 德國MB的支原體qPCR檢測試劑盒(Venor?Gem qEP)經過廠家的方法驗證，符合歐洲和日本藥典標準

在臨床領域，支原體診斷常見兩種方法:一是標本采集后用含血清的培養基進行支原體分離培養，待長出典型菌落后，再進一步做生化鑒定和血清學鑒定;二是用PCR或DNA探針等技術檢查支原體DNA。無論采用哪種方法，所使用的試劑盒都需要有國家醫療器械注冊證后才能使用。

在科研和工業領域，就筆者所知，德國MB公司（全稱Minerva Biolabs）即提供有分別適合不同領域的支原體檢測試劑盒。其中工業領域應用的Venor?Gem qEP試劑盒和Venor? Gem Classic試劑盒經過MB公司的方法學驗證，被廣大藥企所采用。

MB公司還提供有10CFU?支原體高敏標準品和拷貝數標定的支原體基因組DNA等全面配套的產品，方便藥企對PCR/qPCR方法的自我驗證。

圖. 德國MB的10CFU?支原體靈敏度標準品，用于支原體PCR/qPCR的靈敏度和耐用性驗證。