支原體CCU計數法與CFU定量法的比較

在制藥和臨床領域，支原體定量是采用CCU計數法。即用“顏色改變單位(CCU) ”對支原體進行定量。該方法主要是將支原體菌液10倍系列稀釋，然后接種在含酚紅的支原體肉湯培養基中，36°C±1°C 培養7～14天。使培養基變色的最高菌液稀釋度定為1ccu/ml。

而在制藥領域，用PCR/qPCR方法對產品進行支原體檢查時，要求檢測方法的檢測限達到10CFU/ml。CFU即菌落形成單位，它代表著支原體在瓊脂培養基上的菌落數量，這是另外一種定量法。

這兩種定量法是否具有可比性？在2020年2月第4期的《衛生檢驗雜志》上，一篇名為《支原體菌落形成單位與顏色改變單位定量關系研究》的論文報告了兩種方法比較的結果。

在該研究中，作者用A8培養基培養解脲支原體（ATCC 33175）48小時，用支原體培養基培養人型支原體（ATCC 23114）72小時，用SP4培養基培養肺炎支原體（ATCC 29342）6天，然而觀察菌落的生長情況。

同時，作者將菌株凍干粉復溶后進行梯度稀釋，接種到相應肉湯中。為降低誤差，作者對菌液采取了5倍系列稀釋，而非10倍。當培養至肉湯顏色不再變化時，最高稀釋倍數的菌液濃度即為1ccu/ml，然后根據稀釋倍數回算出菌液原液的濃度。

在進行CFU計數時，作者發現，典型支原體菌落的直徑是15mm~300mm。其中，人型支原體和肺炎支原體的菌落可以肉眼識別，而解脲支原體的菌落直徑只有15mm~60mm，需要借助低倍顯微鏡才能看到并計數。

作者重復了10次，結果顯示，對于這3株支原體，CCU計數較為穩定，CFU計數則存在一定的波動。對于解脲支原體，CCU與CFU二者的計量結果接近，無顯著差異；而對于人型支原體和肺炎支原體，CFU計量數值略高于CCU計量數值，有顯著差異。

由于支原體在肉湯生長比瓊脂中要快，因此實際工作中CCU計數更為常見。作者認為，解脲支原體菌落較小，不容易計數，因而標準差較高。10倍稀釋對CCU計量的結果會造成一定誤差，因為實驗中培養基變色的最高稀釋度往往并不是能夠變色的最高稀釋度。降低稀釋倍數會減少誤差，但是會增加工作量。

在該實驗中，作者給出了三個菌株10次試驗的全部數據，因而可對CCU計數與CFU定量的結果進行比較，明確二者之間的關系。