支原體核酸法的靈敏度驗證

支原體核酸檢測法（常規PCR、熒光定量PCR）

應用于細胞培養、生物制藥工業和細胞治療等領域。

和傳統方法比較，它具有

①靈敏度高，特異性好。

②時間短，2-3小時出結果。

③操作簡單等特點，可替代傳統的培養法和DNA染色法。

在生物制藥工業和細胞治療領域，

歐洲藥典和日本藥典均要求對支原體核酸法進行方法學驗證，

其中靈敏度的驗證是關鍵的一個環節。

歐洲藥典和日本藥典要求，

如果用PCR法替代培養法檢測支原體時，此PCR檢測的靈敏度需達到10CFU/ml。

如替代DNA染色法，其靈敏度需達到100CFU/ml，并規定了支原體的范圍，即包含9種支原體（見下面表1）。

據小編市場調查后發現，德國MB公司（全稱Minerva Biolabs）生產的【10CFUTM支原體靈敏度標準品】廣泛被國際和國內各大藥廠所使用，被稱為該領域的“金標準”。

其中，【10CFUTM支原體套裝】包含了歐洲藥典（EP 2.6.7）和日本藥典（JP, 17. edition, chapter G3）列舉的所有支原體物種，可用于qPCR和PCR方法的靈敏度以及耐用性驗證，使得核酸法可作為傳統培養法和染色法的替代方法。

中文品名：10CFU?支原體靈敏度標準品套裝

英文品名：10CFU? Mycoplasma Set Sensitivity Standard   

貨號：102-0002                   

生產商：德國MB公司

規格：共9種支原體10CFU標準品凍干粉，每種標準品2管+陰性對照2管/盒

保存：凍干粉在2-8℃保存

表1.   EP 2.6.7和JP, 17規定的全部9種支原體標準品明細

說明：

以上支原體10CFU?標準品也可單獨購買。單獨購買的規格為10CFU標準品3管+陰性對照2管/盒。另MB公司也提供10CFU的唾液支原體標準品。

01、產品特點

1> 來自英國菌種保藏中心NCTC，為標準支原體株

2> 支原體已滅活，不會對實驗室造成污染，保障細胞實驗室安全

3>傳代次數少，支原體無變異

4>產品為凍干粉，保證其穩定性

5>分析證書（COA）提供該批次GU：CFU比值（支原體基因組/菌落數比值）

02、使用說明

試劑使用前，先達到室溫平衡。

1>標準品管離心，以收集凍干粉至管底。

2> 每個管中添加1ml樣品基質液（注：非待測樣本）。

3> 室溫靜置5分鐘。

4>渦旋振蕩10秒鐘，再離心10秒鐘。

5>使用合適的體積用于DNA抽取。推薦使用MB公司生產的支原體DNA提取試劑盒。該試劑盒一次所需樣本量為200μl。另需加內控對照12μl，以監測提取過程。

6> 取10ul抽提DNA用于PCR擴增。

陰性對照樣品的制備，步驟同上。