怎樣給細胞做支原體篩查

細胞培養是實驗室的常規操作和科研基礎。其中，保證細胞不受支原體的污染是決定實驗成敗的重要環節。然而，支原體污染細胞的發生率又非常高,有報道高達63%。

那么，這些支原體污染是從哪里來的呢？

常可見以下來源：

特別是支原體的污染能通過細胞操作產生的氣溶膠或液滴傳播。一瓶被支原體污染的細胞足以威脅到其他培養的細胞。因此，定期對細胞培養基、細胞培養上清進行支原體的監測是非常重要的。

在支原體的各種檢測方法中，常規PCR法以其

①靈敏度高，特異性好；

②時間短，2-3小時出結果；

③操作簡單；

④無須昂貴儀器等特點廣受青睞。

但不同廠家生產的試劑盒質量差異較大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

這里小編向您推薦的是德國Minerva Biolabs公司的常規PCR檢測試劑盒（一步法）（英文名：Venor?Gem OneStep），它經過許多用戶使用過，廣受好評。

產品介紹

其中貨號11-8025、11-8050為常備現貨。

優勢

①高特異性。如存在支原體污染，則只在270bp左右有一條陽性條帶，無雜帶現象，方便辨識。對其他物種如細菌、真核生物DNA無交叉反應。

②可檢測的支原體種類豐富。支原體屬柔膜體綱、支原體目，下分為支原體科、無膽甾原體科和脲原體科，一共有100多種。Venor?Gem一步法試劑盒可檢測85種支原體科成員(含所有污染細胞的常見支原體)、7種無膽甾原體和1種脲原體，十分全面。

③所需樣本量少，僅需2ul。

④靈敏度高，靈敏度高，即使每個反應只有20個基因組拷貝，也可以檢測出來。

⑤結果可靠。檢測時含陰性對照、陽性對照和內控對照，可避免假陰性和假陽性。

⑥試劑穩定，操作簡單。試劑盒內的PCR mix和陽性對照均為凍干粉，穩定性強。只需復溶后即可立即使用，除樣品外，無須添加其他試劑。PCR mix已包含內控對照，無須再單獨添加（因此被稱為一步法）。

適用范圍

適用于支原體的篩查。適合細胞培養物和生物樣品，僅作研究使用，不適合藥廠的放行檢測。不適合臨床診斷。

操作步驟

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如當支原體DNA＞103拷貝時）。

當支原體DNA＞104拷貝時，內控對照條帶會完全消失。

在80-90bp可能存在引物退火形成的二聚體條帶，此條帶不影響檢測結果。

結果詮釋可依據下表