危險(xiǎn)的耐藥致命菌—粘菌素耐藥菌

粘菌素（Colistin）又稱多粘菌素，屬于抗革蘭氏陰性菌藥物的一種，臨床上主要用于治療革蘭陰性菌感染，特別是綠膿桿菌和大腸桿菌引起的各種感染，如呼吸系統(tǒng)感染、腹膜炎、膽管感染、尿路感染、燒傷感染、眼角膜感染及敗血癥等。

粘菌素存在副作用，包括腎毒性和耳毒性（1,2）。國(guó)內(nèi)外科研人員對(duì)粘菌素進(jìn)行了更廣泛更深入的研究。例如，中國(guó)鑒定了由mcr-1 pEtN基因引起的質(zhì)粒介導(dǎo)的粘菌素（COL）耐受（3）。而最近的臨床數(shù)據(jù)還表明，如果采取某些預(yù)防措施，粘菌素的使用是可以被接受的（4）。

《抗菌藥物臨床應(yīng)用指導(dǎo)原則(2015年版)》中指出，近年來，多重耐藥革蘭氏陰性菌日益增加，碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌、多重耐藥銅綠假單胞菌等對(duì)多粘菌素類藥物耐藥率低，因此多粘菌素藥物重新成為被選用的藥物之一。

粘菌素對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌作用為顯著，對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、痢疾桿菌、流感桿菌、產(chǎn)氣桿菌及肺炎桿菌等也有良好的作用。但隨著抗生素的濫用，耐粘菌素的細(xì)菌被不斷發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，其在世界范圍內(nèi)蔓延并引起人類感染甚至死亡。

在臨床或試驗(yàn)中，分離檢測(cè)粘菌素耐藥菌需要使用粘菌素耐藥菌顯色培養(yǎng)基。HiMedia公司生產(chǎn)的粘菌素耐藥菌顯色培養(yǎng)基（貨號(hào)：M2094，品名：HiCrome? Colistin Resistant Agar Base）特異性高、靈敏度高，用于快速分離、鑒定革蘭氏陰性粘菌素耐藥菌。而且，經(jīng)分離后的菌種還可用作后續(xù)進(jìn)一步試驗(yàn)。

M2094中的酸水解酪蛋白提供氮源和碳源化合物、長(zhǎng)鏈氨基酸、硫和其他必需營(yíng)養(yǎng)素。顯色混合物有助于顏色鑒別。

加入添加劑FD355,35-37℃培育18-24小時(shí)后，顯色底物被粘菌素抗性大腸桿菌產(chǎn)生的β-D-半乳糖苷酶特異性裂解，產(chǎn)生粉紅色至紫色的菌落。粘菌素抗性肺炎克雷伯菌裂解另一種顯色底物，產(chǎn)生金屬藍(lán)色的菌落。假單胞菌產(chǎn)生的無色菌落可能含有輕微的綠色色素。來自蛋白胨的苯丙氨酸和色氨酸有助于檢測(cè)色氨酸脫氨酶活性，指示變形桿菌、摩根菌和普羅維登西的存在，它們菌落呈現(xiàn)褐色。

其中耐粘菌素大腸桿菌、耐粘菌素肺炎克雷伯菌、耐粘菌素銅綠假單胞菌接種量為50-100CFU，在培養(yǎng)基上旺盛生長(zhǎng)且回收率≥50％.粘菌素敏感的革蘭氏陰性菌和金黃色葡萄球菌接種量為10³CFU，在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)受抑制且回收率為0％.

圖1：HiCrome粘菌素耐藥菌顯色培養(yǎng)基

M2094被用作篩選培養(yǎng)基，符合歐盟體外診斷醫(yī)療器械注冊(cè)資格（歐盟IVDD），分離后的菌株應(yīng)遵循《美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)》（CLSI）指南，進(jìn)一步檢測(cè)分離菌株對(duì)粘菌素的敏感性。

參考文獻(xiàn)

1. Cheng YH, Lin TL, Pan YJ, Wang YP, Lin YT, Wang JT.2015. Colistin resistance mechanisms in Klebsiella pneumoniae strains from Taiwan. Antimicrob Agents Chemother 59:2909–2913. doi:10.1128/AAC.04763-14.

2. Lim LM, Ly N, Anderson D, Yang JC, Macander L, Jarkowski A, Forrest A, Bulitta JB, Tsuji BT.2010. Resurgence of colistin: a review of resistance, toxicity, pharmacodynamics, and dosing. Pharmacotherapy 30:1279–1291. doi:10.1592/phco.30.12.1279.

3. Liu YY, Wang Y, Walsh TR, Yi LX, Zhang Retal. Emergence of plasmid-mediated colistin resistance mechanism MCR-1 in animals and human beings in China: a microbiological and molecular biological study. Lancet Infect Dis 2016;16

4. Falagas ME, Rafilidis PI.2009. Nephrotoxicity of colistin: new insight into an old antibiotic. Clin.Infect. Dis. 48:1729-1721.

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