顯色培養(yǎng)基在臨床微生物學上的應用（上）

介紹

病理標本中致病菌的傳統(tǒng)檢測通常是接種一種或多種通用培養(yǎng)基如血平板。它可廣泛長菌，可疑的病原體可通過它的菌落外觀（例如，顏色，形態(tài)，溶血反應）進行檢測。但這種檢測是模糊的，它還需生化檢查和/或血清學試驗進行鑒定。而且它還需檢測共生菌。如皮膚感染的檢查中，需要檢測其他葡萄球菌以確定是否最終是金黃色葡萄球菌導致。沙門氏菌屬是胃腸炎的常見原因，檢查時需要分離來自糞便樣品的病原體。傳統(tǒng)上使用含乳糖和pH指示劑的培養(yǎng)基以使沙門氏菌（非發(fā)酵菌）與共生菌如大腸桿菌區(qū)分開來。但是，在確診沙門氏菌之前，它常常需要篩查許多其他不發(fā)酵乳糖的共生菌（如變形桿菌）。而采用血清學試劑或生化試劑進行篩查，不僅是費時的，而且成本也較高。

在過去的20年中，一系列針對目標致病菌的顯色培養(yǎng)基開發(fā)出來，并具有高度的特異性。它使目標致病菌形成有色菌落，從而與其他共生菌很容易區(qū)分開來。理想情況下，共生細菌應被完全抑制或形成無色菌落，從而使目標菌凸顯出來。

但這種情況很少見。通常加入第二種專屬酶的顯色劑，使共生菌產(chǎn)生另外一種顏色，或者兩種顏色產(chǎn)生疊加，從而區(qū)分共生菌和目標菌。

顯色培養(yǎng)基的設計，主要為了減少篩查共生菌，從而節(jié)省時間和試劑。顯色培養(yǎng)基也可以增加靈敏度，因為帶顏色的菌落可以更容易被檢測到。下面回顧一下常見的幾款醫(yī)學用顯色培養(yǎng)基。

尿道病原菌的檢測

1979年，Kilian和Bülow描述了一種采用β-葡萄糖醛酸酶底物的顯色培養(yǎng)基，可以直接檢測泌尿系統(tǒng)共生的病原菌。在一項納入的9247份尿液樣本的大型研究中，作者報告：94％大腸桿菌菌株可以只通過其菌落顏色就可鑒定，而不存在大腸桿菌菌株被鑒定錯誤。與傳統(tǒng)培養(yǎng)基（血瓊脂和麥康凱瓊脂）相比，作者報告說，培養(yǎng)基的成本降低了46％，處理樣本的時間縮短了67％。在分離出的菌落中，大腸桿菌占大多數(shù)（58％），其他腸桿菌科占24％，腸球菌占11％。也經(jīng)常被隔離。顯色培養(yǎng)基對于尿培養(yǎng)過程中，在勞動時間減少和使用試劑減少這兩方面，其益處得到了證實。

正如上所述，在尿液樣本容易遇到的腸桿菌科中，大腸桿菌是惟一的β-葡萄糖醛酸酶的產(chǎn)生菌。另一款培養(yǎng)基除了采用β-葡萄糖醛酸酶底物外，還采用了β-葡萄糖苷酶的底物，以針對腸球菌、克雷伯菌/腸桿菌屬/沙雷菌，以及采用了色氨酸以檢測色氨酸脫氨酶。該酶存在于變形桿菌、普羅威登斯菌和摩根氏菌中。顯色培養(yǎng)基可直接鑒定常見的尿道病原菌，而無須進行費力的確證試驗。β-半乳糖苷酶底物也可以用于檢測大腸桿菌，但其特異性降低，因為容易將弗氏檸檬酸桿菌錯誤鑒定為大腸桿菌，這是需要增加生化試驗（如吲哚試驗）以進一步證實。

在與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較時，顯色培養(yǎng)基尤其在鑒別混合菌群時占有優(yōu)勢。另有一些補充試驗推薦在顯色培養(yǎng)基使用后進行，包括吲哚試驗、吡咯烷酮肽酶試驗、脲酶試驗、賴氨酸或鳥氨酸脫羧試驗。它們用于增加大腸桿菌鑒定的特異性，或在顯色培養(yǎng)基的幫助下，拓廣可鑒定的菌種范圍。

圖. HiMedia尿道病原菌顯色培養(yǎng)基（貨號：MV1353）

金黃色葡萄球菌的檢測

曾有人對2000個臨床樣本的檢查顯示，葡萄球菌顯色培養(yǎng)基的靈敏度為95.5％，它高于血瓊脂孵育24小時后的靈敏度（81.9％）（P <0.001）。葡萄球菌顯色培養(yǎng)基的特異性也高達97.4％。葡萄球菌顯色培養(yǎng)基還有一個優(yōu)勢是顯著抑制腸球菌。

圖.HiMedia葡萄球菌顯色培養(yǎng)基（貨號：M1468）

MRSA的檢測

耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）為院內(nèi)病原菌，常導致社區(qū)獲得性感染。有報道指出，在一項666個樣本的檢查中，MRSA顯色培養(yǎng)基孵育24h后，靈敏度達到99%，特異性達到99.8%。

圖. HiMedia耐甲氧西林金葡菌顯色培養(yǎng)基(貨號：MV1674), 需添加劑甲氧西林（貨號FD229)和頭孢西丁(貨號FD259)

沙門氏菌的檢測

在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基中，**出現(xiàn)的是Rambach瓊脂。它采用了β-半乳糖苷酶底物檢測大腸桿菌，使大腸桿菌顯藍色，而沙門氏菌顯紅色，因為它發(fā)酵丙二醇后產(chǎn)酸，從而使中性紅顯色。也有的顯色培養(yǎng)基中加入葡萄糖醛酸，它可被沙門氏菌屬發(fā)酵。也有的顯色培養(yǎng)基加入另一種顯色底物，即-半乳糖苷酶的顯色底物。

傳統(tǒng)培養(yǎng)基以乳糖是否發(fā)酵與硫化氫產(chǎn)生為基礎(chǔ)鑒別沙門氏菌。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基與之比較，其特異性更高。在用亞硒酸鹽肉湯增菌后，沙門氏菌即占大多數(shù)，并可被顯色培養(yǎng)基所特異證實。

圖. HiMedia 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(貨號：MV1296)

參考文獻

J.D. Perry and A.M. Freydie`re. The application of chromogenic media in clinical microbiology.Journal of Applied Microbiology. 2007,103: 2046–205