HPV DNA 檢測新方法：以致癌基因E6/E7作靶點(diǎn)，避免漏檢

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　　宮頸癌簡介

　　宮頸癌是女人最多見的惡性腫瘤，其死亡率僅次于乳腺癌。這些年，宮頸癌的發(fā)展趨勢逐漸傾向年輕化且呈逐年上升景象。人乳頭瘤病毒（ HPV）傳染與宮頸癌有高度相關(guān)性，是宮頸癌的首要致病首惡，研討標(biāo)明99.7% 的宮頸癌病人存在HPV傳染。因而，宮頸癌篩查至關(guān)重要。宮頸癌篩查項(xiàng)目中，臨床上以HPV檢測和TCT查看較為多見。

　　HPV基因組介紹

　　HPV是一種雙鏈的小DNA病毒，具有7900個(gè)堿基對，由病毒蛋白外殼和中心DNA物質(zhì)構(gòu)成，無包膜。病毒基因組分為3個(gè)有些：前期基因區(qū)（E）、晚期基因區(qū)（L）及將前期區(qū)與晚期區(qū)分隔的長調(diào)控區(qū)（LCR）。調(diào)控區(qū)首要調(diào)控病毒的轉(zhuǎn)錄，操控病毒蛋白和傳染顆粒的發(fā)生。前期區(qū)編碼E6、E7、E1、E2、E4和E5蛋白質(zhì)，首要參加病毒DNA的仿制、轉(zhuǎn)錄。晚期區(qū)編碼L1、L2蛋白質(zhì)，分別是病毒的首要和非必須衣殼蛋白[1]。

　　E6、E7基因的致癌機(jī)理

　　前期區(qū)（E區(qū)）編碼蛋白基因中，由E6、E7基因編碼的致癌蛋白是致使宮頸上皮癌變的主要因子，編碼的致癌蛋白是致使宮頸上皮癌變的主要因子，這兩種蛋白與細(xì)胞內(nèi)兩種主要抑癌蛋白p53和pRb的聯(lián)系以及調(diào)控可以顯著改動(dòng)細(xì)胞生長周期和DNA修正，由此致使的基因組不穩(wěn)定性是細(xì)胞轉(zhuǎn)化和永生化的必要條件，見下圖[2]。

　　在CIN I期及之前，HPV主要以游離狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中，在病變進(jìn)一步開展的過程中，HPV基因組會(huì)結(jié)合到宿主細(xì)胞基因組，跟著病變程度的添加，HPV最終以結(jié)合狀態(tài)存在。結(jié)合以后，L1基因常常丟掉，而E6/E7基因繼續(xù)存在。

　　L1 與E6/E7分別作為檢測靶點(diǎn)的區(qū)別

　　從低級別病變發(fā)展為癌的過程中，HPV基因組會(huì)發(fā)生整合。在整合過程中，E6/E7基因持續(xù)存在，L1基因可能會(huì)丟失，有漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

　　· 對56個(gè)浸潤性宮頸癌組織活檢樣本分別用L1區(qū)通用引物和E6-E7分型引物進(jìn)行檢測比較發(fā)現(xiàn)，有23個(gè)樣本存在L1區(qū)缺失[3]。

　　· 研究發(fā)現(xiàn)，HPV 18的L1/E1區(qū)更容易丟失。幾乎所有的HPV18陽性的宮頸癌中病毒基因組整合到人基因組上；而HPV16陽性的宮頸癌中也有≤60%的病毒基因組發(fā)生整合[4]。

　　· 一項(xiàng)基于15,774例病人樣本的研究發(fā)現(xiàn)，跟型別特異性E6/E7引物PCR比較，通用引物MY09/11 PCR檢測會(huì)造成10.9%（522例）的漏檢；409例由MY09/11 PCR檢測結(jié)果為陰性的病人中，隨訪發(fā)現(xiàn)最終有104人（25.4%）發(fā)展為CIN2+[5]。

　　相對于以L1基因作靶點(diǎn)，以E6/E7基因作檢測靶點(diǎn)，可以避免由于HPV基因組整合到人基因上造成的漏檢。因此，致癌基因E6/E7更適合作為HPV DNA檢測的靶點(diǎn)。

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　　[1] 胡家昌。 高危型HPVDNA與宿主基因整合及致癌機(jī)理的相關(guān)研究進(jìn)展。 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2015, 24（5）：384-386

　　[2] CB Woodman, SI Collins, LS Young The natural history of cervical HPV infection: Unresolved issues. Nature Reviews Cancer,?2007,?7（1）：11

　　[3] F Karlsen, M Kalantari, A Jenkins, E Pettersen, G Kristensen Use of Multiple PCR Primer Sets for Optimal Detection of Human Papillomavirus. Journal of Clinical Microbiology, 1996, 34（9）：2095-2100

　　[4] Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide. Journal of Pathology, 1999, 189（1）：12

　　[5] Comparison of MY09/11 consensus PCR and type-specific PCRs in the detection of oncogenic HPV types. Journal of Cellular & Molecular Medicine,?2007,?11（4）：881-891

　　文章整合自生物谷