HiMedia培養(yǎng)基的注意事項

HiMedia培養(yǎng)基的注意事項

• 過度加熱：

高溫和/或長時間加熱是pH值漂移、培養(yǎng)基變暗、產(chǎn)生沉淀、凝膠強(qiáng)度差

和培養(yǎng)基質(zhì)量下降的常見原因。建議所有培養(yǎng)基都應(yīng)在滅菌前為溶液狀態(tài)，否則有可能使培養(yǎng)基變暗（美拉德反應(yīng)）。

（a）無菌培養(yǎng)基的傾注：

應(yīng)將無菌瓊脂培養(yǎng)基（45-50°C）倒入平板中，避免在培養(yǎng)皿的蓋子上形成冷凝水。熔化的培養(yǎng)基應(yīng)均勻混合，無氣泡形成，并無菌地傾注無菌培養(yǎng)皿中。18-20ml熔化的瓊脂培養(yǎng)基倒入外徑90mm的培養(yǎng)皿中，可獲得至少為2-3mm的瓊脂層。在傾注平板前，確保瓊脂表面干燥，避免微生物生長。這可通過將平板在孵箱30-40℃放置15-20分鐘來完成。不要過度烘干瓊脂平板。

   （b）添加增補(bǔ)劑：

增補(bǔ)劑可能含有危險和有毒物質(zhì)。遵循標(biāo)簽或說明書上的說明來復(fù)溶增補(bǔ)劑。輕輕漩渦混勻。檢查是否完全溶解，大多數(shù)增補(bǔ)劑包含抗生素或混合抗生素。一旦復(fù)溶后，再儲存在2-8°C，則增補(bǔ)劑的性能可能不如新鮮復(fù)溶的增補(bǔ)劑。 因此，建議使用新鮮配置的增補(bǔ)劑以獲得**性能。

（c）加血：

推薦使用去纖維蛋白血制備血瓊脂培養(yǎng)基，而非使用含有抗凝血劑的血液。

盡量使用新鮮的血液。如果使用儲存的血液（2-8°C，未冷凍），在加入到培養(yǎng)基之前，將血液加熱至約35-37°C。

• 配制培養(yǎng)基的存儲：

如果在配制當(dāng)天沒有使用培養(yǎng)基，那應(yīng)該妥善保存在防潮容器中，防止培養(yǎng)基變干。重要的是要注意，除非所配制培養(yǎng)基的穩(wěn)定性已知，培養(yǎng)基不應(yīng)存放較長時間。同樣，含有瓊脂的培養(yǎng)基不應(yīng)在較高溫度下（40-50°C）保存較長時間，因為瓊脂趨于結(jié)塊。建議使用新鮮配制的培養(yǎng)基而不是儲存的培養(yǎng)基。包含有β-內(nèi)酰胺選擇因子的培養(yǎng)基活性非常短，因此應(yīng)在配制后的數(shù)天內(nèi)使用。

瓊脂平板應(yīng)在2-8°C的密封條件下儲存以避免失去水分。試管或燒瓶中的液體培養(yǎng)基也應(yīng)有氣密密封。失水會導(dǎo)致培養(yǎng)基中某些物質(zhì)的沉淀和結(jié)晶。配制后的培養(yǎng)基穩(wěn)定性有限，并且不同培養(yǎng)基的穩(wěn)定性差異很大。

如果在受控條件下沒有特別規(guī)定，培養(yǎng)基可以在12°C~15°C下儲存數(shù)月。培養(yǎng)基不應(yīng)該儲存在0°C以下，因為它會破壞凝膠結(jié)構(gòu)。在接種前，應(yīng)仔細(xì)檢查平板是否有污染，培養(yǎng)基傾注是否不均勻或瓊脂表面是否有氣泡，顏色是否有變化，是否有溶血和體積收縮引起的裂縫。如果平板和試管中的培養(yǎng)基有缺陷，則應(yīng)丟棄。

• 質(zhì)量控制：

每個新批次的培養(yǎng)基總是與以前之間通過的同樣培養(yǎng)基進(jìn)行平行測試。對于培養(yǎng)反應(yīng)，會用生理鹽水制備梯度稀釋的細(xì)菌懸浮液以獲得每板50~100CFU的菌落。用于無菌檢查的培養(yǎng)基或有特殊應(yīng)用的培養(yǎng)基，則應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的藥典進(jìn)行生長促進(jìn)檢查。

• 質(zhì)量控制菌株：

如果培養(yǎng)基要接受質(zhì)量控制檢查，則應(yīng)同時使用質(zhì)量控制菌株?？蓮臋?quán)威的菌種庫如ATCC或其他機(jī)構(gòu)獲得。如使用商業(yè)菌株，應(yīng)遵循生產(chǎn)商的建議

進(jìn)行增菌和養(yǎng)菌。

藥典、ISO 11133-2014、《水和廢水檢查的標(biāo)準(zhǔn)方法》推薦有特定的試驗菌株。菌液制備用培養(yǎng)基用于菌株的傳代。它可在2-8oC下儲存，最多4周。

• 配制培養(yǎng)基的廢棄處理

（i）實驗室環(huán)境

微生物實驗室給未經(jīng)培訓(xùn)的人員會產(chǎn)生危害風(fēng)險。因此，微生物實驗室應(yīng)限于那些知道如何安全操作的人員。微生物培養(yǎng)對周圍環(huán)境的影響也應(yīng)考慮在內(nèi)。大多數(shù)國家都指定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，并對微生物實驗室進(jìn)行了分級。對于最危險的微生物，應(yīng)在完全封閉的環(huán)境下操作。違反這些規(guī)定可能會觸犯法律。

（ii）人員操作：

對于導(dǎo)致傳染病的材料和已接種的培養(yǎng)基的處理，應(yīng)只有受過微生物產(chǎn)品培訓(xùn)的合格人員才能操作。所有標(biāo)本和培養(yǎng)物都應(yīng)妥善處理，并需經(jīng)高壓滅菌后才能棄置。用戶應(yīng)該確保任何使用的機(jī)械或設(shè)備（和被偶然污染的設(shè)備）得到了安全的消毒或滅菌。反復(fù)使用的玻璃容器（例如錐形瓶，培養(yǎng)試管，玻璃培養(yǎng)皿）中的培養(yǎng)物必須在高壓滅菌器中銷毀（在121℃下約30分鐘）。高壓滅菌器應(yīng)該專一使用，用于培養(yǎng)基或其他材料滅菌的高壓滅菌器不應(yīng)該用于廢棄物的滅菌。

（iii）生物安全：

應(yīng)該認(rèn)識到培養(yǎng)基接菌后，會導(dǎo)致微生物大量產(chǎn)生，具有潛在的危害和傳染性。因此，必須按照已批準(zhǔn)的方法進(jìn)行安全處理。對于微生物樣品的運(yùn)輸和儲存，必須嚴(yán)格遵守國家指南。已污染的和未使用的培養(yǎng)基的廢棄必須根據(jù)地方或國家指南。

• 脫水培養(yǎng)基的安全使用

所有脫水培養(yǎng)基均以細(xì)粉或顆粒形態(tài)供應(yīng)。這些產(chǎn)品是用于在實驗室開展細(xì)菌學(xué)工作，不用于人或動物的消費(fèi)。不應(yīng)吸入培養(yǎng)基，因為可能刺激上呼吸道。如果出現(xiàn)皮疹，請避免長時間接觸培養(yǎng)基。使用干粉培養(yǎng)基時，確保沒有產(chǎn)生過多的粉塵。任何殘留都應(yīng)該用足量的冷水清洗。為防止吸入粉塵，建議使用已批準(zhǔn)的鼻面罩。每個產(chǎn)品都有材料安全數(shù)據(jù)表，可查看。

• 危險品和毒性產(chǎn)品的處置（略）

• 急救措施（略）

• 安全檢查清單（使用和存儲）（略）

• HiMedia包裝瓶上的標(biāo)識（略）