各種Vero細胞培養液的成分比較

近10年來，低血清和無血清Vero細胞培養基的開發受到了重視，一些研究機構發布了自己的研究結果。其中，無血清細胞培養基開發的難度**，因為無血清培養系統中的細胞對于極端的pH值、溫度、滲透壓、機械力和酶處理更為敏感。換用無血清培養基時，每次傳代常需采用較高的密度接種細胞，有時細胞還需要馴化。性能**的細胞培養基則要求能促進細胞的生長、存活率和細胞活力，培養的病毒增殖較快，同時價格不過于昂貴。

許多低血清和無血清Vero細胞培養基以傳統的合成培養基為基礎。有機構研究了DMEM／F12、M199、RPMI1640及MEM∶DMEM／F12四種培養基對流感病毒增殖的影響1。具體過程為：在上述培養基中分別加入濃度為1.0μg／ml的 TPCK胰酶，配制病毒培養液，調整pH為8.0。將T-225細胞培養瓶中長成致密單層的SFM-Vero細胞，經0.125%的胰蛋白酶消化后傳代后，置37℃培養36h；洗液洗滌3次，以MOI = 0.1接種H5N1流感病毒，33℃吸附1h；加入病毒培養液，置33℃培養72h，收獲病毒液，測定血凝效價。結果顯示，**細胞培養時間為36 h。以DMEM／F12為基礎培養基時，病毒收獲液的血凝效價均高于其他培養基，M199僅次于DMEM／F12。

又有機構比較了含10%新生牛血清的M199和MEM培養基對Vero細胞生長的影響。發現M199顯著好于MEM。M199培養的細胞活力為94.35%，MEM為80.50%，M199的細胞濃度為60萬/ml，而MEM為47.5萬/ml2。

由于細胞培養基的成分較為復雜，且各個成分對細胞培養存在一定的協同作用，故以上結論僅作一定程度上的參考。DMEM／F-12是DMEM和F-12以1:1的比例混合而成，F-12配方則是以Ham's F-10 培養基為基礎，提高了膽堿、肌醇、腐胺和幾種氨基酸的濃度，最初是用于在無血清的條件下培養 CHO 細胞。M199培養基則常用于疫苗生產、病毒學以及多種非轉化細胞的培養。最初的開發目的是找到一種成分明確的、不含動物來源成分的培養基。有報道將M199改良后，Vero細胞培養效果優于M199，且病毒滴度更高3。

SFRE M199即是一款M199的改良型，最初用于原代狒狒腎(Bak)細胞的生長和維持，后用于Vero細胞的貼壁培養。它在M199培養基基礎上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并提高了精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸和葡萄糖的濃度。它還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使pH值在細胞延長的維持期內，保持在生理范圍。國際知名生物科學公司HiMedia生產有SFRE M199的1型和2型。二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2（貨號AT090）含有Earle's鹽，而SFRE M199-1含有Hank鹽。兩種鹽的主要差別在于碳酸氫鈉的水平, 碳酸氫鈉在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。選用哪種取決于培養環境中的CO2濃度。

SFRE M199-1與DMEM／F-12的成分作比較，可以發現，SFRE M199-1不含DMEM／F-12所含有的硫酸銅、硫酸亞鐵、亞油酸、腐胺、硫鋅酸，但含有DMEM／F-12所不含的核苷類成分，如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、脫氧核糖、硫酸腺嘌呤等，這些成分都與DNA的合成有關。另外，在一些共有成分上，兩種培養基的成分濃度互有高低，如SFRE M199-1的甘氨酸、丙氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、生物素、丙酮酸鈉的濃度都比DMEM／F-12要高，DMEM／F-12的異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、泛酸鈣、葉酸、吡哆醛鹽酸鹽、肌醇、葡萄糖、次黃嘌呤濃度比SFRE M199-1的成分濃度高。

目前，由于配方保密，關于Vero細胞無血清或低血清培養基的具體成分并未完全公開。由于改良型M199以及Vero細胞用SFRE M199培養時有報道3、4、5可見想見，SFRE M199取代M199來大規模培養Vero細胞，是將來發展的趨勢。

HiMedia Laboratories公司是國際**的培養基生產廠家，其生產通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP的質量管理體系認證。締一生物作為中國區代理商，在生物制藥，疫苗生產，科研，臨床治療等領域，提供有優質可靠的各種培養基及進口血清、支原體檢測試劑等，持續不斷地為中國生物產業的發展助力。

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參考文獻

1. 馬磊，等.用無血清適應的Vero細胞培養H5N1型流感病毒條件的優化.中國生物制品血雜志.2015,28(7):741-744

2. 薛英，等.不同培養基及不同的葡萄糖濃度對VERO細胞生長狀況的影響.草食家畜.2010,12(4):70-71

3. 陳嘉雯,等.改良M199培養基在Vero細胞培養中的適用性.中國生物制品血雜志.2014,1(27):76-81

4. 吳長安. 無血清化學限定培養基對原代細胞的培養及其對病毒的敏感性. 國外醫學.生物制品分冊. 1981, 4:190-191

5. Jack Litwin. The growth of Vero cells as suspended aggregates in serum-free medium.Animal Cell Technology, 1992: 414-417