食源性大腸桿菌 O157：H7 的檢測方法簡介

隨著國內生活水平的提升，食品的消費量呈逐年上升的趨勢，但同時也面臨著食品安全方面的威脅。大腸桿菌O157:H7是一種重要的食源性致病菌，屬于腸桿菌科埃希氏菌屬，是腸出血性大腸桿菌中具代表性的血清型。大腸桿菌 O157∶H7 的主要研究方法有傳統分離鑒定法、分子生物學法和免疫學法，根據同種研究方法的相似原理，搭建不同的檢測平臺，來構建致病菌的多種檢測手段。

傳統分離鑒定法

傳統分離鑒定法需要通過液體培養基培養提前增菌 10～20 h，然后將其定量涂布到培養皿上，37 ℃培養 18~24 h。利用絕大多數大腸桿菌O157∶H7 菌株不發酵山梨醇的特性，可以在山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）培養基上進行初步分離，培養的大腸桿菌 O157∶H7 菌落呈無色半透明。但有其他血清型的大腸桿菌 O157 和革蘭氏陰性菌如變形菌等也不發酵山梨醇，會造成假陽性。

締一生物向您介紹一款國際上HiMedia公司的生產的大腸桿菌O157：H7顯色培養基（CT-SMAC平板）貨號：M1340。該培養基中含有山梨醇和BC指示劑，不含乳糖。大多數大腸菌群菌株 會發酵山梨醇，產生酸。當pH值低于6.8時，培養基中的中性紅會變成粉紅色。同時普通大腸桿菌具有?-D葡萄糖醛酸酶，當遇到培養基中BC指示劑時，會呈現藍綠色。當兩種顏色疊加時，普通大腸桿菌在此種培養基中，會呈現藍紫色。用于從食物和動物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。

大腸桿菌O157:H7不發酵山梨醇，也不具備?-D葡萄糖醛酸酶活性，因而在此種培養基中產生的菌落為無色。如果需要，此培養基還可添加 碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），可使培養基更具有選擇性。亞碲酸鉀可使大腸桿菌O157選擇性生長，并抑制嗜水氣單胞菌和普羅維登菌的生長；頭孢克肟可抑制變形桿菌。

傳統分離培養法的檢測費用低廉，在食品大腸桿菌 O157:H7 的檢測中作為主要手段，廣泛應用于檢測領域。

分子生物學檢測方法

大腸桿菌 O157:H7 的全基因組已獲得，并收錄在 Genebank 中。在此基礎上，大腸桿菌 O157:H7 的檢測衍生出了一系列分子生物學方法，主要有聚合酶鏈式反應（PCR）技術（包括普通 PCR、實時熒光 PCR、多重 PCR 等）、基因芯片技術和噬菌體檢測技術。

用分子生物學法檢測大腸桿菌 O157:H7，檢測過程相對簡單，檢測靈敏度較高，但因大腸桿菌 O157:H7 一般在食品中的污染量很低，為保證檢測結果的準確性仍需要一定的增菌培養過程，且其檢測的特異性會一定程度上受食品成分的影響。

免疫學檢測方法

例如免疫膠體金試紙檢測法 免疫膠體金層析技術以硝酸纖維素膜為載體，以膠體金作為標記物，樣品滴加至微膜孔后，在毛細管作用下，通過抗原抗體特異性結合，利用膠體金顏色反應，達到檢測抗原或抗體的免疫標記技術。該方法以其檢測快速、檢測成本低、靈敏度高、適合現場檢測等優點在檢測領域中快速發展，但易出現假陽性結果。

利用免疫學檢測技術可大大縮短檢測時間，提高檢測靈敏度，但需要高特異性的抗體，同時對于不同種類的食品需要優化不同的對應體系以達到更好的檢測效果。

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