Vero細胞的無血清培養

Vero細胞是日本學者Yasumura等于1962年從正常成年非洲綠猴腎分離獲得的貼附依賴性細胞系，Vero一詞由世界語中的verde（意為綠色的）和reno（意為腎臟的）兩個詞合并而成。Vero細胞是世界衛生組織和我國生物制品規程認可的疫苗生產細胞系。

與用作疫苗生產的原代細胞、二倍體細胞和其他一些傳代細胞基質相比，Vero細胞具有以下特點：

①來源方便，連續傳代，生長速度快；

②對多種病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高；

③遺傳性狀穩定，惡性轉化程度低，生物安全性較高；

④培養條件要求不苛刻，易于在生物反應器實施大規模培養。

疫苗的接種對象主要是大范圍的健康人群，其質量和安全性一直是備受關注的問題。

疫苗的質量和安全性在很大程度上取決于疫苗的生產方式和過程。血清是一種組分復雜而尚不完全明確的混合物，至少含有1000種不同的蛋白質，總蛋白量高達60～150g／L，它能為細胞的體外培養提供必要的生長因激素、細胞貼附因子和營養成分。受Vero細胞自身的貼附依賴生長特性和動物細胞培養技術發展進程的影響，本世紀之前的Vero細胞培養及病毒疫苗生產均存在著對血清的依賴。

血清組分的復雜性和不確定性，以及其中存在病毒等病原微生物污染的潛在風險，影響著病毒疫苗的生產工藝和疫苗質量。從病毒疫苗生產工藝角度考慮，血清組分的復雜性和批次間的質量差異增加了病毒疫苗生產的不穩定性和產品質量控制的難度；從病毒疫苗的安全性角度考慮，血清中潛在的病原微生物，如引起牛海綿狀腦炎的朊病毒，給疫苗的使用帶來了不容忽視的安全隱患。

由血清使用所造成的細胞培養過程和細胞表達產物安全性的不確定因素增加的現實問題，成為動物細胞無血清培養技術研究和應用的發展動因。隨著動物細胞無血清培養技術的不斷進步，為包括Vero細胞在內的動物細胞大規模無血清培養技術的應用提供了必要的技術支撐，無血清培養已成為包括疫苗在內的生物技術藥物生產的總趨勢。2010年，美國、歐盟和日本等發達國家將全面停止在生物制藥中應用血清，FDA將停止含血清細胞培養工藝生產的生物技術新藥的申報受理。

國際上HiMedia公司生產的SFRE199-1培養基是病毒生產細胞培養基M199的改良型。SFRE199分為I型和II型，即SFRE199-1和SFRE199-2。和M199相比，SFRE199顯著升高了8種氨基酸的濃度，包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸，也升高了葡萄糖的濃度，使能獲得較好的細胞生長而不表現出毒性。

另外，加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和胰島素，降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度，還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使細胞在維持的延長期內，pH值保持在生理范圍。

國外有研究表明，SFRE 199-1可作為無血清培養基的基礎成分，用于Vero細胞的培養，并在Vero細胞靜置培養中，以SFRE199-1為基礎的無血清培養基可獲得較好的細胞生長效果。

Vero細胞無血清培養基的優化主要涉及以下兩方面。其一，從提高病毒疫苗安全性的需要出發，以非動物來源成分替代動物來源成分、化學組分明確成分替代化學組分不確定成分；其二，從提高病毒疫苗生產效率的目的考慮，根據細胞生長和代謝動力學特征優化培養基的組成。

但無血清培養也存在一定不足，如：

①目前多數無血清培養基的通用性較低，應用不廣泛，不具有普遍性；

②目前低血清培養基研究開發的相關數據缺乏在線交流，可查閱的資料有限，不能有效促進細胞馴化技術的發展；

③無血清培養基的制作成本較高，不利于商業化開發與應用；

④細胞在無血清培養基中，對外界條件如物理和化學等因素的改變較敏感，等。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在細胞培養、微生物培養和檢測領域，一如既往地為您帶來優質的服務。

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