Vero細(xì)胞的無血清培養(yǎng)

Vero細(xì)胞是日本學(xué)者Yasumura等于1962年從正常成年非洲綠猴腎分離獲得的貼附依賴性細(xì)胞系，Vero一詞由世界語中的verde（意為綠色的）和reno（意為腎臟的）兩個(gè)詞合并而成。Vero細(xì)胞是世界衛(wèi)生組織和我國生物制品規(guī)程認(rèn)可的疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系。

與用作疫苗生產(chǎn)的原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞和其他一些傳代細(xì)胞基質(zhì)相比，Vero細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：

①來源方便，連續(xù)傳代，生長速度快；

②對(duì)多種病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高；

③遺傳性狀穩(wěn)定，惡性轉(zhuǎn)化程度低，生物安全性較高；

④培養(yǎng)條件要求不苛刻，易于在生物反應(yīng)器實(shí)施大規(guī)模培養(yǎng)。

疫苗的接種對(duì)象主要是大范圍的健康人群，其質(zhì)量和安全性一直是備受關(guān)注的問題。

疫苗的質(zhì)量和安全性在很大程度上取決于疫苗的生產(chǎn)方式和過程。血清是一種組分復(fù)雜而尚不完全明確的混合物，至少含有1000種不同的蛋白質(zhì)，總蛋白量高達(dá)60～150g／L，它能為細(xì)胞的體外培養(yǎng)提供必要的生長因激素、細(xì)胞貼附因子和營養(yǎng)成分。受Vero細(xì)胞自身的貼附依賴生長特性和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展進(jìn)程的影響，本世紀(jì)之前的Vero細(xì)胞培養(yǎng)及病毒疫苗生產(chǎn)均存在著對(duì)血清的依賴。

血清組分的復(fù)雜性和不確定性，以及其中存在病毒等病原微生物污染的潛在風(fēng)險(xiǎn)，影響著病毒疫苗的生產(chǎn)工藝和疫苗質(zhì)量。從病毒疫苗生產(chǎn)工藝角度考慮，血清組分的復(fù)雜性和批次間的質(zhì)量差異增加了病毒疫苗生產(chǎn)的不穩(wěn)定性和產(chǎn)品質(zhì)量控制的難度；從病毒疫苗的安全性角度考慮，血清中潛在的病原微生物，如引起牛海綿狀腦炎的朊病毒，給疫苗的使用帶來了不容忽視的安全隱患。

由血清使用所造成的細(xì)胞培養(yǎng)過程和細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物安全性的不確定因素增加的現(xiàn)實(shí)問題，成為動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)技術(shù)研究和應(yīng)用的發(fā)展動(dòng)因。隨著動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)技術(shù)的不斷進(jìn)步，為包括Vero細(xì)胞在內(nèi)的動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模無血清培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用提供了必要的技術(shù)支撐，無血清培養(yǎng)已成為包括疫苗在內(nèi)的生物技術(shù)藥物生產(chǎn)的總趨勢(shì)。2010年，美國、歐盟和日本等發(fā)達(dá)國家將全面停止在生物制藥中應(yīng)用血清，F(xiàn)DA將停止含血清細(xì)胞培養(yǎng)工藝生產(chǎn)的生物技術(shù)新藥的申報(bào)受理。

國際上HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1培養(yǎng)基是病毒生產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)基M199的改良型。SFRE199分為I型和II型，即SFRE199-1和SFRE199-2。和M199相比，SFRE199顯著升高了8種氨基酸的濃度，包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸，也升高了葡萄糖的濃度，使能獲得較好的細(xì)胞生長而不表現(xiàn)出毒性。

另外，加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和胰島素，降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度，還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使細(xì)胞在維持的延長期內(nèi)，pH值保持在生理范圍。

國外有研究表明，SFRE 199-1可作為無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分，用于Vero細(xì)胞的培養(yǎng)，并在Vero細(xì)胞靜置培養(yǎng)中，以SFRE199-1為基礎(chǔ)的無血清培養(yǎng)基可獲得較好的細(xì)胞生長效果。

Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一，從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā)，以非動(dòng)物來源成分替代動(dòng)物來源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分；其二，從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮，根據(jù)細(xì)胞生長和代謝動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)化培養(yǎng)基的組成。

但無血清培養(yǎng)也存在一定不足，如：

①目前多數(shù)無血清培養(yǎng)基的通用性較低，應(yīng)用不廣泛，不具有普遍性；

②目前低血清培養(yǎng)基研究開發(fā)的相關(guān)數(shù)據(jù)缺乏在線交流，可查閱的資料有限，不能有效促進(jìn)細(xì)胞馴化技術(shù)的發(fā)展；

③無血清培養(yǎng)基的制作成本較高，不利于商業(yè)化開發(fā)與應(yīng)用；

④細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中，對(duì)外界條件如物理和化學(xué)等因素的改變較敏感，等。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)和檢測(cè)領(lǐng)域，一如既往地為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

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