微生物法與HPLC法測定葉酸含量方法比較

GB 10765-2010《嬰幼兒配方食品》中規定了葉酸可以作為嬰兒配方食品添加物。因此準確地測定葉酸的含量對嬰幼兒配方產品的生產加工、功效評價等有重要意義。維生素的檢測方法有儀器法、微生物法和基于微生物法原理的試劑盒法。微生物法是目前應用最為廣泛的，也是美國官方分析化學家協會的推薦方法。目前，國家標準GB 5009.211-2014《食品中葉酸的測定》和GB 5413.16-2010《嬰幼兒配方食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)測定》中對食品和嬰兒食品和乳制品中葉酸的測定均采用微生物法。

除微生物法以外，還可以選用高效液相法測定葉酸的含量。高效液相色譜法是利用高壓輸液泵將規定的流動相泵人裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離側定的色譜方法。注人的供試品，由流動相帶入柱內，各組分在柱內被分離，并依次進人檢測器，由積分儀或數據處理系統記錄和處理色譜信號。

高效液相法測定食品中葉酸含量操作方法和所用藥品分析相似：稱取磨細的樣品置于離心管中，加入流動相液體，超聲波提取15 min－30 min。取出后加入流動相定容，搖勻后過濾，濾液用 HPLC 法分析。

在有限的空間與營養成分條件下，微生物的生長過程會受到競爭與抑制的作用。選用微生物法測定葉酸含量時，自配的基礎培養基雜質含量高，建議使用HiMedia公司生產的葉酸測定用培養基（貨號：M543）。培養基的pH值對L.C生長很重要，一般保持在pH6.8~7.2,過高過低均不利于細菌生長。測定葉酸常用的菌種酪乳酸桿菌（ATCC 7469）。為保證測定管中滴加等量的接種液,接種液可用10mL滅菌針筒吸取，水平固定于鐵架臺上輕輕旋轉推桿，滴加菌液。測定管比色前，應用混勻器將菌液搖勻后進行比色。

微生物法與高效液相色譜法相比較，其優點是可以測定成分復雜樣品中的化合物形式葉酸，結果更準確；對于添加劑形式的葉酸則與HPLC法具有同樣的準確度，同時微生物法具有靈敏度高的優點，檢測限可達到0.01ng·mL-1，而高效液相色譜法檢出限為10μg·mL-1，且價格便宜。但微生物法實驗周期長，每周一次的菌種傳代保藏比較繁瑣；高效液相色譜法的特點是測定結果準確、操作簡便、省時省力、分析速度快、分離效果好，是近年來發展速度較快的測定葉酸的方法，分析操作方法和所用藥品分析相似，適合檢測純品，但分析成本高，液相色譜儀價格及日常維護費用貴。