雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法

推薦使用

經(jīng)MOPS緩沖的 TurboDoma培養(yǎng)基

純合成培養(yǎng)基中挑選雜交瘤細(xì)胞的建議

雖然，雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)依賴于外源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的補(bǔ)充，如：血清、白蛋白、水解產(chǎn)物、蛋白質(zhì)等，但是，仍可應(yīng)用化學(xué)合成的TurboDoma培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。總之，你目前使用的培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充成分越少，細(xì)胞從這種蛋白依賴型培養(yǎng)基過(guò)渡到適應(yīng)TurboDoma完全無(wú)蛋白培養(yǎng)基的速度就會(huì)越快。

1.通過(guò)離心過(guò)濾（380轉(zhuǎn)，3分鐘）采集細(xì)胞后，加入TurboDoma培養(yǎng)基，使細(xì)胞能夠再次懸浮，且細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到1 x 105/ml，如：將2 x 106 細(xì)胞接種在75 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入20 ml TurboDoma培養(yǎng)基。如果，培養(yǎng)基的pH值低于支持細(xì)胞生長(zhǎng)的范圍，即pH值< 7.0，培養(yǎng)基的顏色從橘紅變?yōu)榈S，這時(shí)，需另加入20 ml新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基體積增大一倍。上述情況通常在接種后3-4天出現(xiàn)。

2.注意觀察細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的狀態(tài)。細(xì)胞培養(yǎng)4-5天內(nèi)，由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的丟失，會(huì)導(dǎo)致大量細(xì)胞的死亡。但是，仍有一些代謝活躍的細(xì)胞能夠很快適應(yīng)新的生長(zhǎng)環(huán)境。

3.正在生長(zhǎng)的細(xì)胞由于乳酸的產(chǎn)生會(huì)引起pH值的下降。當(dāng)培養(yǎng)基的pH值低于支持細(xì)胞生長(zhǎng)的范圍時(shí)，倒出50%的培養(yǎng)基，然后，再加入50%新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。如果更換培養(yǎng)基的間隔時(shí)間越來(lái)越短，例如：細(xì)胞表現(xiàn)出旺盛的代謝能力，那么，就可增加新鮮培養(yǎng)基的量，直至將剩余的培養(yǎng)基全部換為新的培養(yǎng)基。

4.為了細(xì)胞增殖能夠達(dá)到滿意的效果，必須保證培養(yǎng)過(guò)程中使用相同的培養(yǎng)瓶。而且，我們建議：在細(xì)胞適應(yīng)TurboDoma培養(yǎng)基的過(guò)程中，要頻繁地更換培養(yǎng)液，不要急于傳代。細(xì)胞需要逐漸適應(yīng)新的培養(yǎng)環(huán)境。

5.懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，最初，可能會(huì)形成50個(gè)細(xì)胞左右的細(xì)胞團(tuán)，大小不一。漸漸地，細(xì)胞團(tuán)慢慢消失，細(xì)胞逐漸擴(kuò)散增殖。對(duì)于懸浮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，可通過(guò)稀釋培養(yǎng)液或加入新鮮培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行。

注意：細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為了能夠使細(xì)胞在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)入正常生長(zhǎng)周期，必須等細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到一定程度時(shí)才可分瓶，進(jìn)行傳代培養(yǎng)！