雜交瘤培養基推薦使用方法

推薦使用

經MOPS緩沖的 TurboDoma培養基

純合成培養基中挑選雜交瘤細胞的建議

雖然，雜交瘤細胞的生長依賴于外源性營養物質的補充，如：血清、白蛋白、水解產物、蛋白質等，但是，仍可應用化學合成的TurboDoma培養基進行細胞培養。總之，你目前使用的培養基中營養補充成分越少，細胞從這種蛋白依賴型培養基過渡到適應TurboDoma完全無蛋白培養基的速度就會越快。

1.通過離心過濾（380轉，3分鐘）采集細胞后，加入TurboDoma培養基，使細胞能夠再次懸浮，且細胞密度應達到1 x 105/ml，如：將2 x 106 細胞接種在75 cm2細胞培養瓶中，加入20 ml TurboDoma培養基。如果，培養基的pH值低于支持細胞生長的范圍，即pH值< 7.0，培養基的顏色從橘紅變為淡黃，這時，需另加入20 ml新鮮培養基，使培養基體積增大一倍。上述情況通常在接種后3-4天出現。

2.注意觀察細胞生長時的狀態。細胞培養4-5天內，由于細胞內蛋白質的丟失，會導致大量細胞的死亡。但是，仍有一些代謝活躍的細胞能夠很快適應新的生長環境。

3.正在生長的細胞由于乳酸的產生會引起pH值的下降。當培養基的pH值低于支持細胞生長的范圍時，倒出50%的培養基，然后，再加入50%新鮮的培養基，繼續進行培養。如果更換培養基的間隔時間越來越短，例如：細胞表現出旺盛的代謝能力，那么，就可增加新鮮培養基的量，直至將剩余的培養基全部換為新的培養基。

4.為了細胞增殖能夠達到滿意的效果，必須保證培養過程中使用相同的培養瓶。而且，我們建議：在細胞適應TurboDoma培養基的過程中，要頻繁地更換培養液，不要急于傳代。細胞需要逐漸適應新的培養環境。

5.懸浮細胞生長時，最初，可能會形成50個細胞左右的細胞團，大小不一。漸漸地，細胞團慢慢消失，細胞逐漸擴散增殖。對于懸浮細胞的傳代培養，可通過稀釋培養液或加入新鮮培養基來進行。

注意：細胞培養過程中，為了能夠使細胞在24小時內進入正常生長周期，必須等細胞生長密度達到一定程度時才可分瓶，進行傳代培養！