威正翔禹生物科普：關于胎牛血清知識問答（二）

胎牛血清在細胞培養中受到很多實驗人的青睞，今天小編把關于胎牛血清的保存使用做一個整理，希望對于初次接觸細胞培養的你能夠有所裨益哦！

1、胎牛血清有必要做熱滅活嗎?  

答：實驗顯示，胎牛血清是不需要做熱滅活的。

（1）首先將胎牛血清置于50℃以上的溫度長達30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此，有些實驗室還是把胎牛血清的熱滅活作為常規來執行。事實上， 熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。（2）Triglia和Linscott曾對商業胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發現胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50％，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發育分化。又有研究結果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用。（3）此外，熱滅活經常給血清產品帶來負面的影響，對血清的加熱經常導致血清中沉淀的產生，導致很多營養因子的損失。因此，胎牛血清已無需再滅活。

總之，經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量！

2、細胞培養中出現黑點是污染嗎？如何處理？  

答：一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化。

那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸；（2）血清質量不好，反復凍融的結果；（3）配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長；（4）配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點；（5）培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

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