威正翔禹生物科普：關(guān)于胎牛血清知識(shí)問(wèn)答（二）

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中受到很多實(shí)驗(yàn)人的青睞，今天小編把關(guān)于胎牛血清的保存使用做一個(gè)整理，希望對(duì)于初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)的你能夠有所裨益哦！

1、胎牛血清有必要做熱滅活嗎?  

答：實(shí)驗(yàn)顯示，胎牛血清是不需要做熱滅活的。

（1）首先將胎牛血清置于50℃以上的溫度長(zhǎng)達(dá)30分鐘是完全沒(méi)有必要的。盡管如此，有些實(shí)驗(yàn)室還是把胎牛血清的熱滅活作為常規(guī)來(lái)執(zhí)行。事實(shí)上， 熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。（2）Triglia和Linscott曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50％，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化。又有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。（3）此外，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面的影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，導(dǎo)致很多營(yíng)養(yǎng)因子的損失。因此，胎牛血清已無(wú)需再滅活。

總之，經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量！

2、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？  

答：一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化。

那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：（1）細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸；（2）血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)；（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn)；（5）培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

有著“細(xì)胞完美搭檔”贊譽(yù)的Ausbian胎牛血清，早已在各大實(shí)驗(yàn)室悄然流行。2014年，Ausbian血清商標(biāo)已在中國(guó)商標(biāo)局注冊(cè)，目前此商標(biāo)屬上海威正翔禹生物科技有限公司**所有。Ausbian血清目前在中國(guó)市場(chǎng)主要為澳洲血源的產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于中科院、醫(yī)科院、軍科院、細(xì)胞庫(kù)、北大、清華、復(fù)旦、浙大等科研院所及大學(xué)的重點(diǎn)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。